[发明专利]厚藤IpLEA基因及其编码蛋白和应用

权利要求书

1.氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的厚藤胚胎发生晚期丰富蛋白IpLEA和/或IpLEA基因在提高植物对高盐/干旱的耐受中的应用，所述IpLEA基因的cDNA阅读框为如SEQ IDNO.2所示的核苷酸序列，或为与SEQ ID NO.2互补配对的核苷酸序列，或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的厚藤胚胎发生晚期丰富蛋白IpLEA的核苷酸序列。

2.氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的厚藤胚胎发生晚期丰富蛋白IpLEA和/或IpLEA基因在农作物转基因育种中改良农作物对高盐/干旱耐受性、和/或调控农作物对氧化胁迫耐受性的应用，所述厚藤胚胎发生晚期丰富蛋白IpLEA基因的cDNA阅读框为如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，或为与SEQ ID NO.2互补配对的核苷酸序列，或为编码氨基酸序列如SEQID NO.1所示的厚藤胚胎发生晚期丰富蛋白IpLEA的核苷酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征为，所述农作物为拟南芥。

4.插入有厚藤IpLEA基因的酿酒酵母重组表达载体，其特征为，所述厚藤IpLEA基因的cDNA阅读框为如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，或为与SEQ ID NO.2互补配对的核苷酸序列，或编码为氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的厚藤IpLEA蛋白的核苷酸序列。

5.权利要求4所述的酿酒酵母重组表达载体在提高工程菌株酿酒酵母对高盐和氧化胁迫的耐受性中的应用。

6.插入有IpLEA基因的大肠杆菌表达载体，其特征为，所述IpLEA基因的cDNA阅读框为如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，或为与SEQ ID NO.2互补配对的核苷酸序列，或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的厚藤IpLEA蛋白的核苷酸序列。

7.权利要求6所述的大肠杆菌重组表达载体在提高工程菌大肠杆菌对高盐和干旱胁迫耐受性中的应用。

8.一种提高拟南芥的耐盐和/或抗旱性的方法，其特征为，包括以下步骤：

(1)获得厚藤胚胎发生晚期丰富蛋白基因IpLEA的cDNA全长，其cDNA阅读框序列如SEQID NO.2所示；

(2)将含有IpLEA的cDNA全长的酵母表达载体pYES-DEST52重组质粒转化野生型酵母菌株W303，分别在含盐量5％-8.8％的培养基上测试转基因酵母的耐盐性；

(3)以含有厚藤胚胎发生晚期丰富蛋白基因cDNA的酵母表达载体pYES-DEST52重组质粒为模板，以引物扩增IpLEA基因的cDNA全长阅读框序列，用于获取插入至拟南芥转基因超表达载体pMD1的cDNA阅读框片段，构建厚藤胚胎发生晚期丰富蛋白转基因超表达重组载体IpLEA-pMD1；

将上述厚藤胚胎发生晚期丰富蛋白转基因超表达重组载体IpLEA-pMD1转化进入农杆菌GV3101感受态菌株中，通过拟南芥花序侵染法转化拟南芥植株，通过Kan抗性筛选获得拟南芥转基因后代。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征为，步骤(3)中的引物为SEQ ID NO.5和SEQ IDNO.6。