[发明专利]一种组蛋白免疫共沉淀（ChIP）试剂配方

说明书

本发明涉及一种组蛋白免疫共沉淀(ChIP)试剂配方，包含五步，本发明的有益成果为：本发明提供的一种组蛋白免疫共沉淀试剂配方，本发明的方法在经过实例研究后。本发明的配方会综合被检测者基因型和组蛋白信息，通过复杂的步骤保证试剂的质量。

技术领域

本发明涉及医学领域，涉及一种组蛋白免疫共沉淀(ChIP)试剂配方。

背景技术

免疫共沉淀(ChIP)是一种能真实反映细胞内组蛋白与DNA相互作用的实验技术。其原理是利用抗原抗体反应，通过用特异性抗体将目的蛋白及与之结合的DNA共同沉淀下来，再采用PCR、蛋白质分析技术、生物芯片技术等对目的DNA片段进行分析。组蛋白免疫共沉淀是表观遗传学研究的主要内容。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种解决或部分解决上述问题的组蛋白免疫共沉淀(ChIP)试剂配方。

为达到上述技术方案的效果，本发明的技术方案为：一种组蛋白免疫共沉淀(ChIP)试剂配方，包含：

(1)进行蛋白-DNA交联和裂解细胞：用终浓度为1％甲醛溶液固定总数为1×10⁷的K562细胞，室温下放置10min，甘氨酸溶液中止反应；用预冷的PBS洗涤细胞两次，离心去上清后加入1ml含蛋白酶抑制剂的SDS裂解液裂解细胞；

(2)超声断裂染色质：按优化好的条件(100W，每次超声10s，共5次，间隔30s)断裂细胞裂解液中的染色质，4℃下离心后保留上清；

(3)免疫共沉淀：超声处理后的溶液中加入蛋白G-琼脂糖小珠进行预清除，离心后吸取1％(v/v)上清留作Input溶液在剩余的上清中加入免疫共沉淀抗体，包括阳性对照抗体(anti-RNA Polymerase II，1.0μg/管)、阴性对照抗体(normal mouse IgG，1.0μg/管)和目的抗体(依抗体说明书推荐量：抗ac H3抗体10μg/管，抗ac H4抗体3μg/管)，在4℃摇床上孵育过夜，次日溶液中加入蛋白G-琼脂糖小珠吸附免疫沉淀复合物，短暂离心后去上清，顺次用低盐、高盐、氯化锂和TE缓冲液清洗蛋白G-琼脂糖小珠；

(4)免疫沉淀复合物洗脱：用洗脱缓冲液洗脱免疫沉淀复合物，同时在装有Input溶液的管中加入相同体积的洗脱缓冲液；

(5)蛋白-DNA结合物解交联，释放DNA：加入5mol/L Na Cl溶液，65℃水浴孵育4-5h或过夜；

(6)用DNA纯化柱回收DNA。

本发明的有益成果为：本发明提供的一种组蛋白免疫共沉淀试剂配方，本发明的方法在经过实例研究后。本发明的配方会综合被检测者基因型和组蛋白信息，通过复杂的步骤保证试剂的质量。

具体实施方式

为了使本发明所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行详细的说明。应当说明的是，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明，能实现同样功能的产品属于等同替换和改进，均包含在本发明的保护范围之内。具体方法如下：