[发明专利]一种细胞富集分离方法

说明书

本发明提供了一种细胞富集分离方法，包括：1)、将第一类磁珠和生物样本相结合，生物样本包含第一类细胞以及第二类细胞，第一类磁珠结合有第一类抗体，第一类细胞与第一类磁珠相结合；2)、将捕获磁头置于与第一类磁珠相结合的生物样本中，第一类细胞吸附在捕获磁铁装置上；3)、将第一类细胞从捕获磁头装置上释放，将生物样本中的第一类细胞清除；4)、将第二类磁珠加入到已清除第一类细胞的生物样本中，第二类细胞与第二类磁珠相结合；5)、将捕获磁头置于与第二类磁珠相结合的生物样本中，第二类细胞吸附在捕获磁铁装置上；6)、将第二类细胞从捕获磁头装置上释放。本发明检测灵敏度及纯度高，并可用于单细胞或少量细胞的多种基因标志物的分析。

技术领域

本发明属于细胞分离技术领域，尤其涉及一种细胞富集分离方法。

背景技术

循环肿瘤细胞(CTC)是研究肿瘤扩散机理和肿瘤早期检测、预防和临床治理疗效的重要标志物，因为其存在于血液中的数量较少，对检测技术的要求很高，而现今市场上的技术在检测灵敏度和合理价格方面都不能满足市场上作为常规检测项目的要求。市场上较成熟的检测技术多是以阳性磁珠富集法或者阴性磁珠富集法单独使用，而其在检测灵敏度和细胞的后续基因分析方面均受到限制，例如，单一的阳性磁珠富集法的检测灵敏度受到限制以及捕获的靶细胞纯度不高，单独的阴性磁珠富集法在靶细胞的纯度方面同样受到非常大的限制。

发明内容

针对背景技术中的上述缺陷，本发明的主要目的在于提供一种细胞富集分离方法，将阳性磁珠富集法和阴性磁珠富集法相结合,提高了靶细胞检测灵敏度、纯度和检测的稳定性。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：一种细胞富集分离方法，所述方法包括：

1)、将第一类磁珠和生物样本相结合，所述生物样本包含第一类细胞以及第二类细胞，所述第一类磁珠结合有第一类抗体，通过所述第一类抗体将所述第一类细胞与第一类磁珠相结合；

2)、将捕获磁头置于与所述第一类磁珠相结合的生物样本中，所述第一类细胞吸附在捕获磁铁装置上；

3)、将第一类细胞从捕获磁头装置上释放，清除所述生物样本中的第一类细胞；

4)、将第二类磁珠与已清除第一类细胞的生物样本相结合，所述第二类磁珠结合有第二类抗体，通过所述第二类抗体将所述第二类细胞与第二类磁珠相结合；

5)、将捕获磁头置于与所述第二类磁珠相结合的生物样本中，所述第二类细胞吸附在捕获磁铁装置上；

6)、将第二类细胞从捕获磁头装置上释放；

所述第一类磁珠为阴性磁珠时，所述第二类磁珠为阳性磁珠，所述第一类细胞为非靶细胞，所述第二类细胞为靶细胞。

作为进一步的优选，所述步骤3)中，将第一类细胞从捕获磁头上释放后，将所述捕获磁铁再置于与所述第一类磁珠相结合的生物样本中，再次吸附所述第一类细胞。此操作可以重复多次，直至达成完全或接近完全清除第一类细胞的目的。

作为进一步的优选，所述步骤6)中，将第二类细胞从捕获磁头上释放后，将所述捕获磁铁再置于与所述第二磁珠相结合的第二类细胞中，再次吸附所述第二类细胞。此操作亦可重复多次，直至获得最大限度捕获第二类靶细胞。

作为进一步的优选，所述步骤3)或6)中，所述捕获磁头表面设置有磁套，所述第一或第二类细胞吸附在捕获磁头装置的磁套上。

作为进一步的优选，将经步骤5)捕获后剩余的细胞和阳性富集收集到的靶细胞分别收集到容器或载玻片上，作细胞鉴定、计数或基因杂交分析。

作为进一步的优选，将所述肿瘤靶细胞用于细胞计数以及单细胞或少量细胞的多基因标志物分析。

作为进一步的优选，所述生物样本为血液样本或生物体液，所述非靶细胞包括白细胞和红细胞，所述靶细胞包括循环肿瘤靶细胞。