[发明专利]盐酸沙格雷酯遗传毒性杂质Ⅵ及其制备方法、检测方法、应用

说明书

技术领域

本发明属于药物质量控制领域，具体涉及盐酸沙格雷酯遗传毒性杂质Ⅴ、Ⅵ及其制备方法、检测方法、应用。

背景技术

盐酸沙格雷酯片1993年在日本首次上市，商品名为Anplag，是一种5-HT2受体阻滞剂，能够抑制血小板凝聚、抑制血管收缩，具有抗血栓作用以及改善微循环。其适应症为改善慢性动脉闭塞症引起的溃疡、疼痛以及冷感等缺血性诸症状。

目前，盐酸沙格雷酯原料药及其制剂的质量研究涉及如下四种光降解杂质：

申请人先前提供了一种一锅法制备盐酸沙格雷酯光降解杂质Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的方法(申请号2017106469276)，该方法通过一锅法降解制备得到含有杂质Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的降解混合物，再通过高速逆流色谱法一次性分离得到杂质Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，纯度均在98％以上，可以用作杂质对照品，且总收率在80％以上，原料利用率高，步骤少，效率高，其高速逆流色谱图如图1所示。申请人对其中两个未知色谱峰1、2进行了鉴定，发现为两种具有具有潜在遗传毒性的杂质(具有环氧警示结构，可参见“遗传毒性杂质的警示结构，中国新药杂志2014年第23卷第18期”)，而且申请人在盐酸沙格雷酯原料药的强制光降解实验中检出了这两种杂质，进一步的Ames试验显示该两种杂质均为阳性。根据药品中遗传毒性杂质的控制要求(药品中遗传毒性杂质的评估和控制，中国现代应用药学2014年9月第31卷第9期)，应将这两种杂质列入质量标准进行监控。

发明内容

本发明目的在于提供盐酸沙格雷酯遗传毒性杂质Ⅴ、Ⅵ及其制备方法、检测方法、应用。

本发明通过下面的技术方案得以实现：

如下化学结构的遗传毒性杂质Ⅴ、Ⅵ：

上述遗传毒性杂质Ⅴ、Ⅵ的制备方法，包括：

步骤S1，光降解：

将盐酸沙格雷酯用水溶解配制成盐酸沙格雷酯溶液，先于80-90℃高温处理1-2小时，再依次于一百二十万勒克斯冷白荧光灯照射4-6小时、200瓦小时/平方米的紫外荧光灯照射3-5小时，最后将降解的溶液浓缩冷冻至干得降解混合物；

步骤S2，高速逆流色谱分离：

用等体积固定相和流动相将上述降解混合物溶解作为样品溶液，以乙酸乙酯-乙醇-水-甲酸(4:1:5:0.025，v/v/v/v)为两相溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，在主机转速800r/min、流速2.0mL/min、检测波长272nm条件下，根据色谱图收集流分，浓缩干燥得杂质Ⅴ、Ⅵ。

优选地，高速逆流色谱采用多层聚四氟乙烯螺旋管作为分离管，直径2.3mm，分离体积230mL，β值为0.5-0.8。

优选地，高速逆流色谱分离柱温为35℃。

优选地，高温处理优选85℃处理1.5小时。

优选地，光照处理优选方案为：先于一百二十万勒克斯冷白荧光灯照射5小时，再于200瓦小时/平方米的紫外荧光灯照射4小时。

上述遗传毒性杂质Ⅴ、Ⅵ的检测方法，包括如下色谱参数：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶(C18)色谱柱；

流动相：A相为体积百分浓度为0.2％的四氢呋喃-水溶液；

B相为体积百分浓度为0.2％的四氢呋喃-乙腈溶液；

洗脱程序：0-5min，5％B相；5-10min，5％→35％B相；10-30min，35％→65％B相；30-32min，65％→100％B相；32-35min，100％B相；35-37min，100％→5％B相；37-40min，5％B相；流速为1.0mL/min；

柱温：34-36℃；检测波长：272±2nm。

优选地，所述色谱柱的规格为长250mm，内径4.6mm，填料粒径5μm。

优选地，色谱柱优选ZORBAX SB-C18柱。

遗传毒性杂质Ⅴ、Ⅵ在盐酸沙格雷酯原料药或制剂的质量控制中用作杂质对照品的用途。

本发明的优点：

1、本发明提供了两种具有潜在遗传毒性的杂质Ⅴ、Ⅵ(具有环氧警示结构)，而且本申请的发明人在盐酸沙格雷酯原料药的强制光降解实验中检出了这两种杂质，进一步的Ames试验显示该两种杂质均为阳性，遗传毒性风险非常高。根据药品中遗传毒性杂质的控制要求，这两种遗传毒性杂质应当列入质量标准进行监控，本发明提供的遗传毒性杂质Ⅴ、Ⅵ可以在盐酸沙格雷酯原料药或制剂的质量控制中用作杂质对照品；