[发明专利]硫酸多黏菌素B的分析检测方法及应用

说明书

本发明公开了一种硫酸多黏菌素B的分析检测方法。该检测方法包含以下步骤：采用高效液相色谱法联合蒸发光散射器，对硫酸多黏菌素B进行分析检测，即可。该方法实现了将硫酸多黏菌素B中四个组分完全分离，专属性强，操作简单，且不受其他有机杂质干扰，效果与EP 9.0原料药的HPLC方法接近、灵敏度高、简单快速，能更准确地用于测定硫酸多黏菌素B制剂中各组分含量。

技术领域

本发明涉及硫酸多黏菌素B分析检测方法及应用。

背景技术

多黏菌素B(polymyxin B)是由多黏芽胞杆菌产生的、由多种氨基酸和脂肪酸组成的一种碱性多肽类抗生素。目前的生产主要采用微生物发酵法生物合成，再经提取精制得到。临床使用其硫酸盐，主要作为抗感染类药物使用，治疗由绿脓杆菌等革兰氏阴性菌引起的皮肤创面、泌尿系统以及眼、耳、气管等部位感染，也可用于败血症、腹膜炎等。硫酸多黏菌素B为结构相似的多组分混合物，包括多黏菌素B₁、B₂、B₃、B₁-I。其中，B₁和B₂是有效成分，B₃和B₁-I为主要杂质。化学结构式如下：

具体地，多黏菌素B₁、B₂、B₃和B₁-I结构上的区别如下所示：

目前，欧洲药典EP 9.0、美国药典USP 40及中国药典ChP 2015均收载了硫酸多黏菌素B或其制剂的相关分析检测方法。

其中，在EP 9.0中硫酸多黏菌素B含量测定采用硫酸钠-磷酸-水-乙腈体系的反相高效液相色谱法等度洗脱，紫外波长215nm处检测，外标法计算各组分含量，单针分析时间约50min。无相关制剂的检测方法；

USP 40和ChP 2015虽采用微生物抗生素效价法计算硫酸多黏菌素B及其制剂的含量，但在多黏菌素组分检查项下也采用了和EP 9.0一致的高效液相色谱法，且均要求以干燥品计，B1、B2、B3、B1-I总和≥80.0％，B3≤6.0％、B1-I≤15.0％；

Orwa等采用乙腈-硫酸钠水溶液(0.7％，m/v)-磷酸水溶液(5.8％，v/v)-水(22.25：50：5：22.75)为基础流动相，在215nm考察了不同pH下硫酸多黏菌素B₁、B₂、B₃的分离情况(Journal of Chromatography A,870(2000)237–243)。

由于硫酸多黏菌素B中的各组分结构相似，仅在脂肪酸链和Z位氨基酸残基有区别，且各单组分的含量差异大。加之硫酸多黏菌素B在215nm下吸收较弱，采用上述方法时各组分的信号强度低，所以会一定程度影响定量分析时色谱积分的准确性；并且，等度洗脱方法也有导致分离各组分的柱效低、分析时间较长等缺点。因此，开发一种快速、灵敏、准确、同时能对各组分进行定量分析的方法，对药品的质量控制有重要意义。

发明内容

本发明所解决的技术问题在于为了克服现有技术中采用抗生素微生物效价法测定硫酸多黏菌素B时专属性差、精密度低、或者采用高效液相色谱联用紫外检测器对硫酸多黏菌素B进行分析检测时，存在流动相配制复杂、灵敏度低、重复性差、分析时间长等问题，从而提供了一种硫酸多黏素菌B的分析检测方法及其应用，该分析方法相对于抗生素微生物效价法专属性强操作简单，可以将四个组分完全分离，且不受其他有机杂质干扰，效果与EP 9.0原料药的HPLC方法接近、灵敏度高、简单快速，能更准确地用于测定硫酸多黏菌素B制剂中各组分含量。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的。