[发明专利]一种液相色谱串联质谱法定量干血滤纸片中他克莫司试剂盒及其制备

说明书

本发明提供了一种高灵敏液相色谱串联质谱法定量干血滤纸片中他克莫司试剂盒及其制备方法。试剂盒由特定浓度的标准曲线干血滤纸片、质控样本干血滤纸片、样本处理液、内标液、流动相调节液组成。干血滤纸片打孔取样，先用硫酸锌溶液处理，以子囊霉素为内标，用乙腈沉淀，采用C₁₈键合相硅胶为固定相，以乙腈‑1mM乙酸铵为流动相进行反相色谱梯度分离，运用质谱仪进行定量检测，离子选择通道分别为m/z 821.4→m/z 768.4(他克莫司)和m/z 809.6→m/z 756.7(内标子囊霉素)。本发明的试剂盒，测试灵敏度可达到1.0ng/ml，各项方法学指标均可满足干血滤纸片中他克莫司血药浓度监测的需要。

技术领域

本发明涉及一种基于干血滤纸片和液相色谱串联质谱技术开发的干血滤纸片中他克莫司定量检测试剂盒，更具体地说是采用液相色谱质谱技术对干血滤纸片中他克莫司进行准确定量检测的方法。

本发明还涉及本发明试剂盒的生产方法和应用。

背景技术

他克莫司(tacrolimus，简称FK506)是从链霉菌属培养物中分离得到的大环内酯类新型免疫抑制剂，能有效抑制T淋巴细胞激活。FK506与内源性细胞受体结合，形成一个亲免素复合物，从而发挥药理作用。目前FK506已在肝、肾、心、胰等器官移植中广泛用于抗排斥及自身免疫系统相关疾病的治疗。FK506的血药浓度与免疫抑制强度和毒副反应相关，不仅治疗窗窄而且药动学个体差异大，临床使用FK506需要进行全血药浓度监测。

目前临床常规监测FK506全血浓度的方法主要有微粒子捕捉酶免疫发光技术(microparticle enzyme immunoassay，MEIA)、酶联吸附免疫分析技术(enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)和液相色谱质谱技术(LC-MS/MS)。ELISA法和MEIA法对体内FK506及其代谢产物产生交叉免疫反应，使实际测得结果为FK506及其代谢物之和。LC-MS/MS是近年来迅速发展的定量分析技术，具有高选择性、高灵敏度、样本处理简单和自动化程度高的特点，日渐成为体内药物分析、治疗药物监测、新生儿遗传疾病筛查和药物代谢研究等领域的实用方法。

肝、肾、心、胰等器官移植和自身免疫系统相关疾病的患者分布全国各地，尤其以农村、中小城市为主，大多数患者需要终身服药并进行浓度定量监测。而能够开展FK506全血浓度的定量监测的机构主要在大中型城市的三级医院和医疗检验所，长期监测FK506浓度存在困难。采用干血滤纸片(Dried blood spot，DBS)进行全血样品收集，以LC-MS/MS技术进行浓度定量，能够很好的解决FK506全血样品运输成本和稳定性问题，真正实现异地检测。

DBS即将全血样品收集在卡纸上，从样本保存的角度上来说，干血斑比全血更为稳定，其储存及运输成本远低于全血，干血滤纸片需要采集的样本量较少，在需要多次采样来进行诊断的检测中有着特定的优势。由于干血滤纸片的简易性和较高的稳定性，在许多大规模疾病筛查中(如新生儿的遗传病筛查)已经显现出来了极为广泛的应用前景。国外已经广泛将干血滤纸片应用于疾病筛查样本运输中，在一定程度上替代了传统的全血的运输方式。国内也逐渐开始使用干血滤纸片进行血液制品的运输，多家医院已经使用干血滤纸片运输血样进行艾滋病(HIV)、丙型肝炎、糖原贮积病如庞贝病等疾病筛查。DBS用于LC-MS/MS定量FK506未见报道。

研究开发一种结果准确、价格低廉、操作简便、易于推广的LC-MS/MS定量干血滤纸片中他克莫司试剂盒，使其能广泛应用于我国FK506常规血药浓度监测中，能够解决农村和中小城市患者FK506监测成本和稳定性问题，真正实现异地检测，也将有助于提高FK506检测质量、促进检测方法标准化和规范化。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于干血滤纸片和液相色谱串联质谱技术开发的干血滤纸片中他克莫司定量检测试剂盒，以满足他克莫司血药浓度监测的需要。

本发明的另一目的在于提供上述试剂盒的制备方法。