[发明专利]自体脂肪间充质干细胞的培养方法和使用的培养基

说明书

本发明涉及自体脂肪间充质干细胞的培养方法和使用的培养基。具体的说，本发明涉及的培养方法包括如下步骤培养预处理、贴壁培养、补液与换液、一次或任选的多次的细胞传代、以及任选的制备脂肪间充质干细胞的制剂和任选的对所得脂肪间充质干细胞进行细胞冻存、复苏。本发明的培养基中包括DMEM和FBS。使用本发明培养基培养所述自体脂肪间充质干细胞特别是眼部脂肪细胞的自体脂肪间充质干细胞时，能够呈现本发明所述优异技术效果。得到的这些自体脂肪间充质干细胞可以用于自体应用，例如由眼部脂肪得到的自体脂肪间充质干细胞可用于面部注射，例如于面部皱纹、太阳穴、泪沟等部位的注射填充。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种脂肪间充质干细胞的培养方法，特别是涉及一种自体脂肪间充质干细胞的培养方法，所述自体脂肪间充质干细胞特别是来源于眼部的自体脂肪间充质干细胞。本发明还涉及上述自体脂肪间充质干细胞培养中所用的培养基。使用本发明培养基培养所述自体脂肪间充质干细胞特别是眼部脂肪细胞的自体脂肪间充质干细胞时，能够呈现本发明所述优异技术效果。得到的这些自体脂肪间充质干细胞可以用于自体应用，例如由眼部脂肪得到的自体脂肪间充质干细胞可用于面部注射，例如于面部皱纹、太阳穴、泪沟等部位的注射填充。

背景技术

皮肤老化是内源性和外源性因素共同作用，从而导致的皮肤衰老现象，主要表现为皮肤变薄松弛、干燥粗糙、弹性变差、皱纹形成、局部色素过度沉着及毛细血管扩张等等。内源性因素包括遗传因素和不可抗力因素，而紫外线照射、风吹、吸烟、高糖饮食和接触有害化学物质等造成的皮肤显著变化，则属于外源性老化。

内源性皮肤老化表现为皮肤纹理细密，松弛和缺乏弹性；外源性皮肤老化表现为皱纹粗糙，质地不平整，肤色灰黄、伴色素沉着，弹性组织变性，以及毛细血管扩张等。

自体脂肪组织是目前临床常用的长效组织填充材料，不仅容易获得，而且填充效果持久，无排异反应，可用于治疗凹陷瘢痕和较深的皱纹，还可明显改善皮肤质地，但脂肪组织移植会导致皮下脂肪容积的扩增。研究发现，脂肪组织中的脂肪间充质干细胞(ADSCs)对于维持脂肪组织的存活更新起到至关重要的作用。因此，使用ADSCs的面部应用成为面部抗衰老的可行途径。

ADSCs是来源于脂肪的间充质干细胞，取材方便，其提取效率比骨髓间充质干细胞高40倍，并且体外培养条件下增殖速度更快；具有多向分化能力，可以向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞，甚至神经细胞分化。目前临床Ⅰ期和Ⅱ期实验都证明，ADSCs在心脏、直肠、乳腺等多种器官损伤修复中的应用是安全、有效的，而且已有研究证实ADSCs具有促进皮肤再生修复的作用。

ADSCs在多个方面呈现出其固有的优势。ADSCs属于单核细胞家族，是成体干细胞中的一种。它来自处理过的脂肪组织，培养时在细胞培养皿中以贴壁、粘附方式生长，并具有多样分化的能力，不只分化为脂肪细胞，还可以分化为肌细胞、软骨细胞、神经细胞、血管内皮细胞、骨细胞等，因此它们也在组织工程中被广泛地应用。例如，ADSCs可通过自我复制分化为脂肪细胞，在组织再生中发挥作用；ADSCs可以分化成血管内皮细胞或周围细胞；ADSCs在缺氧或其他条件下，可以分泌血管生长因子；当ADSCs和脂肪细胞一起移植的时候，它能够分化成内皮细胞，阻止纤维化和脂肪坏死的发生，提高脂肪成活率；根据最近的许多具体研究结果表明，ADSCs能表达多种细胞因子VEGF、IGF、TGF-β1、bFGF、EGF等，还通过表达VEGF、IGF-1等血管生长因子，来阻止凋亡的发生，维持脂肪细胞的成活率。