[发明专利]基于RNA适体的茶碱定量检测方法

说明书

本案公开了一种基于RNA适体的茶碱定量检测方法，包括：采用两条RNA探针特异性捕获茶碱并形成夹心结构，其中，一条RNA探针1还用于与电极结合，另一条RNA探针2结合电信号分子；通过测量经修饰后的电极的电化学响应值获得茶碱的含量；其中，两条RNA探针具有能够彼此互补配对的片段，以使得夹心片段能够首尾串联并最终形成线状长链。本案通过结合适体的特异性识别功能、DNA四面体的分子界面组装功能和银纳米颗粒的电化学溶出伏安性能，实现了茶碱的高灵敏度、高特异性、低干扰的电化学检测。

技术领域

本发明涉及一种茶碱的检测方法，特别涉及一种基于RNA适体的茶碱电化学定量检测方法。

背景技术

茶碱(theophylline)为1,3-二甲基-3,7-二氢-1H-嘌呤-2,6-二酮，外观为白色结晶或结晶性粉末，无臭、味苦，其分子式为C₇H₈N₄O₂，分子量为180.16，沸点为390.1℃(760mmHg)，蒸汽压为2.72E-06mmHg(25℃)。在临床上广泛用于治疗哮喘、慢性阻塞性肺病和早产儿呼吸暂停等疾病。此外，茶碱还有促进儿茶酚胺释放和调节钙离子内流的作用。

然而茶碱的药物动力学容易受到多种因素的影响，个体差异大。用药量大、血药浓度高时往往表现为非线性动力学，特别是早产儿发育过程的不可预见性和非线性，治疗浓度与中毒浓度往往重叠，导致临床上某些患儿的血药浓度过低或过高，造成治疗效果不佳或发生毒副作用，从临床表现难以判定是否浓度过低，因此急需发展对血药浓度进行监测的技术。

传统的检测方法包括紫外-可见分光光度计法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法以及一些商用的免疫法试剂盒。然而以上方法存在一些限制，包括需要使用大型设备、昂贵的试剂等，因此仍需要开发新型的灵敏度高、成本低的检测方法。

发明内容

针对现有技术中的不足之处，本案提出了一种基于RNA适体的茶碱定量检测方法，以期用于实现对茶碱浓度的实时精准监测。

为实现上述目的，本发明的技术方案概述如下：

一种基于RNA适体的茶碱定量检测方法，其包括：

采用两条RNA探针特异性捕获茶碱并形成夹心结构，其中，一条RNA探针1还用于与电极结合，另一条RNA探针2结合电信号分子；

通过测量经修饰后的电极的电化学响应值获得茶碱的含量；

其中，两条RNA探针具有能够彼此互补配对的片段，以使得夹心片段能够首尾串联并最终形成线状长链。

优选的是，所述的基于RNA适体的茶碱定量检测方法，其中，RNA探针1通过一分子组装界面与电极结合。

优选的是，所述的基于RNA适体的茶碱定量检测方法，其中，该分子组装界面是具有四面体结构的DNA分子。

优选的是，所述的基于RNA适体的茶碱定量检测方法，其中，该具有四面体结构的DNA分子由4条DNA探针组成，该4条DNA探针的序列分别为：

DNA探针a：CCAGCCGAAAACATTCCTAAGTCTGAAACATTACAGCTTGCTACACGAGAAGAGCCGCCATAGTA；

DNA探针b：HS-C₆-TATCACCAGGCAGTTGACAGTGTAGCAAGCTGTAATAGATGCGAGGGTCCAATAC；

DNA探针c：HS-C₆-TCAACTGCCTGGTGATAAAACGACACTACGTGGGAATCTACTATGGCGGCTCTTC；