[发明专利]无患子果皮活性提取物的制备方法及其抗真菌的应用

说明书

技术领域

本发明属于天然产物有效成分的提取工艺技术领域，具体涉及一种无患子果皮活性提取物的制备方法及其抗真菌的应用。

背景技术

由于各种抗生素的广泛应用、器官移植等技术的发展，真菌感染的患病率和致死率在全球呈上升趋势。根据侵犯人体部位的不同，可以将真菌感染性疾病分为浅表真菌感染，皮肤真菌感染，皮下组织真菌感染和系统性真菌感染。其中，浅表真菌感染和皮肤真菌感染统称为浅部真菌感染，皮下组织真菌感染和系统性真菌感染统称为侵袭性真菌感染。浅部真菌感染是致病真菌侵犯皮肤的角质层、毛发和甲板所导致的感染，主要致病菌为皮肤癣菌，其他常见致病菌还有马拉色菌和念珠菌等，直接接触是其主要传播方式。皮肤癣菌等主要致病菌来源于3个属，即小孢子菌属、毛癣菌属和表皮癣菌属，霉菌性阴道炎主要致病菌为念珠菌属。深部真菌感染主要由条件致病性真菌,如念珠菌属、曲霉属和隐球菌属所致,占造血干细胞移植、器官移植和其他免疫缺陷患者真菌感染的80％以上。

由于各种高效广谱抗菌药物的广泛使用，病原微生物产生了多种耐药机制以保持物种的延续，而形成生物被膜就是一种重要的耐药机制。生物被膜是指大量微生物黏附于某些物体的表面形成的一种膜样聚集，具有复杂的三维结构和功能，目前认为人体80％微生物感染与病原微生物的生物被膜相关。生物被膜相关性感染会影响患者预后，临床研究表明由产生生物被膜念珠菌造成的念珠菌血流感染其致死率是由不产生生物被膜念珠菌造成的血流感染的1.77倍，生物被膜产生也是念珠菌血流感染患者死亡的独立危险因素。动物实验也表明，从生物被膜扩散的游离念珠菌较非生物被膜游离念珠菌具有更强的毒力，从而其感染可造成更差的结局。生物被膜相关性感染很难控制，因为其具有更强的耐药性，普通抗真菌药物治疗很难完全清除生物被膜。目前临床对念珠菌生物被膜尚无理想对策，如何防治和克服生物被膜耐药问题，已成为临床上极具挑战性的课题。

无患子(Sapindus mukorossi Gaertn.)，又名油患子、木患子、洗手果、肥皂树等，属于无患子科无患子属落叶小乔木，广泛分布于我国淮河以南和东南亚地区，在我国主产于广东、广西。无患子始记载于《本草纲目》，具有清热祛痰、消积杀虫等作用。现代药理研究发现，无患子具有多种生理活性，主要包括抗细菌、抗真菌、抗肿瘤、灭螺活性、杀虫活性、抗炎症、抗溃疡、保护心肌缺血、防血栓、杀精、保肝等。

无患子果皮的主要化学成分为无患子活性部位，主要为常春藤皂苷元型三萜皂苷，具有很强的非离子表面活性作用，是优良的天然洗涤剂，所以目前关于无患子的大量研究主要集中在其清洁去污能力上。无患子在洗化用品上应用较多，其抗菌活性部位的提取方法主要包括水提法或有机溶剂提取法。虽然研究者们对无患子的分离提取做了不少工作，但总的来说都还处于初步研究阶段，要实现规模化生产还存在纯度低，如水提法，水提法的提取率较高，但是往往会将一些单糖、寡糖、氨基酸、蛋白质、黏液质等也被提取出来，从而导致提取物中的皂苷纯度降低，或是成本高、可操作性差等缺点。目前还有超滤法分离、微波提取等无患子活性部位提取工艺，但存在清洗苦难、溶剂损失大，纯度不高等缺点，因此很有必要对无患子活性部位提取工艺进行更深入的研究，以获得低成本、高纯度、操作简便、绿色环保的提取工艺，实现或完善无患子活性部位的工业化生产。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种无患子果皮活性提取物的制备方法，制备的无患子果皮活性提取物纯度达到95％以上，具有操作简便、适合工业化生产、纯度高、活性好、机制明确、无毒副作用的特点；本发明还提供一种将提取物应用于抗真菌药物中应用。

本发明所述的一种无患子果皮活性提取物的制备方法，将无患子果皮粉碎，用溶剂处理，合并处理得到的提取液，浓缩，将浓缩液通过D392型弱碱性阴离子交换树脂柱，依次用水和不同浓度的乙醇水溶液洗脱，收集乙醇水溶液的洗脱液，将收集的洗脱液进行浓缩、干燥，即得产品。

其中：

优选地，依次用水和不同浓度的乙醇水溶液洗脱，收集乙醇水溶液的洗脱液为：依次用水、50±2％乙醇、75±2％乙醇、95％±2乙醇洗脱，收集50±2％乙醇、75±2％乙醇和95±2％乙醇洗脱液。其中50±2％乙醇代表浓度为48-52％的乙醇水溶液，其他类推。

溶剂为水、乙醇水溶液、甲醇水溶液或丙酮水溶液。

用溶剂处理为用溶剂超声处理或添加溶剂加热回流处理。

用溶剂处理次数为至少3次，每次处理时溶剂添加重量是无患子果皮的8-12倍，每次处理时间为1.8-2.2小时。