[发明专利]一种血红蛋白质控品的制备方法

权利要求书

1.一种血红蛋白质控品的制备方法，其特征是：依次包括以下步骤：

1)配料：取健康人新鲜全血，加入抗凝剂；

2)洗涤离心：向配料中加入生理盐水，离心并除去上清液；

3)获取红细胞液：洗涤离心完成后加入生理盐水恢复至步骤1)中健康人新鲜血液的体积，得到红细胞液；

4)提取血红蛋白：向红细胞液中加入聚乙二醇辛基苯基醚并于漩涡混匀器上震荡混匀，使红细胞膜破裂并释放出血红蛋白，然后离心，提取上层的血红蛋白溶液，余下部分弃去；

5)透析：向血红蛋白溶液加入缓冲液，然后将血红蛋白溶液装入透析袋，并置于透析液中透析；

所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液、硼酸与四硼酸钠缓冲液、邻苯二甲酸盐酸缓冲液中的一种；

所述透析液包括：

缓冲液：50～200mM，pH＝7.0～7.5

氯化钠：8-10g/L

抗氧化剂：50～200mM

防腐剂质量百分含量：0.1～5％

其中上述溶剂为纯化水；

6)分装：向透析好的血红蛋白加入含冻干保护剂和填充剂的稀释液稀释至设定质控品浓度，然后分装，分装后进行低温预冻和冷冻干燥，制成冻干粉；

所述稀释液包括：

氯化钠：8-10g/L

抗氧化剂：50～200mM；抗氧化剂为柠檬酸三钠、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠和维生素C中的一种；

冻干保护剂：0.5～10％；冻干保护剂为甘油、海藻糖、蔗糖和聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种；

填充剂：0.5～10％；填充剂为PEG20000、牛血清白蛋白和明胶中的一种；

防腐剂质量百分含量：0.1～5％；防腐剂为叠氮钠、苯甲酸钠和ProClin300中的一种。

2.根据权利要求1所述的一种血红蛋白质控品的制备方法，其特征是：

在步骤1)中取1～5ml健康人新鲜全血，健康人新鲜全血为HIV、HCV、HBsAg和TP均呈阴性的全血。

3.根据权利要求1所述的一种血红蛋白质控品的制备方法，其特征是：

在步骤2)中，向配料中加入8～10倍配料体积的生理盐水，生理盐水为0.8％-1％的NaCl溶液；按照800-1200转/分钟离心8-12分钟；洗涤离心过程重复8～10次。

4.根据权利要求1所述的一种血红蛋白质控品的制备方法，其特征是：

在步骤4)中，向红细胞液中加入体积比为0.5～2％的聚乙二醇辛基苯基醚并于漩涡混匀器上震荡混匀10～15分钟，使红细胞膜破裂并释放出血红蛋白，再于2800-3200转/分钟离心20～30分钟，用移液器吸取上层70～80％的液体得到血红蛋白溶液，余下部分弃去。

5.根据权利要求1所述的一种血红蛋白质控品的制备方法，其特征是：

在步骤5)中，将透析袋置于3～5L且3-5℃透析液中透析16～24小时。

6.根据权利要求1所述的一种血红蛋白质控品的制备方法，其特征是：

在步骤6)中，将透析好的血红蛋白用全自动血球分析仪上进行定值，定值完成后加入含冻干保护剂和填充剂的稀释液稀释至所需质控品浓度。

7.据权利要求1或6所述的一种血红蛋白质控品的制备方法，其特征是：

低温预冻为在-30℃～-50℃的条件下，将分装后血红蛋白溶液预冻1.5-2.5小时成型；

冷冻干燥分两个阶段；第一个干燥阶段为：升温速度采用3～5℃每小时，持续12～16小时，第一个干燥阶段为：升温速度采用15～20℃每小时，持续8～10h。