[发明专利]一种检测DGAT1基因突变的引物及其在牦牛乳品质预测和鉴别方法中的应用

说明书

本发明公开了一种检测DGAT1基因突变的PCR‑SSCP引物对，所述PCR‑SSCP引物对的正向引物的核苷酸序列为序列表中的SEQ ID NO.1，反向引物的核苷酸序列为序列表中的SEQ ID NO.2；并提供了其在牦牛乳品质预测和鉴别中的应用及鉴定方法和相应的试剂盒。本发明的有益效果为：本发明是根据普通牛DGAT1基因“第15内含子‑第17外显子”区序列设计了一对引物，对牦牛基因组DNA进行PCR扩增后进行SSCP分型筛选检测，通过分析带型确定牦牛DGAT1基因型和等位基因，通过等位基因序列比对确定SNPs突变，并分析DGAT1基因突变对乳脂率的影响，从而预测该牛的乳脂率高低，其优点是反应灵敏、特异性强、操作简单、精确度高，可进行快速检测。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种检测DGAT1基因突变的PCR-SSCP引物及其在牦牛乳品质预测和鉴别方法中的应用。

背景技术

牦牛分布在青藏高原及其周边高寒牧区，为当地牧民提供肉、乳和毛绒等高原特色畜产品，是当地重要的生产和生活资源。牦牛乳营养丰富，风味独特，是加工高原特色乳产品的主要原料乳。牦牛乳中乳脂率、乳蛋白率和总固体物质含量分别为5.45%～7.22%、4.86%～5.40%、16.91%～17.40%，均高于荷斯坦牛乳。

乳脂是乳的重要组成部分，乳脂肪中甘油三酯95%以上，其合成受甘油-3-磷酸酰基转移酶（GPAT）、1-酰基甘油-3-磷酸酰基转移酶6（AGPAT6）、磷脂酸磷酸酯酶1（LPIN1）、二酰基甘油酰基转移酶（DGAT）等作用，其中DGAT是甘油三酯合成最后一步反应的关键酶。DGAT基因包括DGAT1 和DGAT2两种属于不同基因家族的基因。DGAT1基因属酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶(acylCoA: cholesterol acyltransferase, ACAT)基因家族，参与脂肪合成、储存及脂蛋白组装等过程，是影响乳品质性状的重要功能候选基因。牛DGAT1基因位于14号染色体，由17个外显子和16个内含子组成，编码489个氨基酸。牛DGAT1基因第8外显子AA→CG的双碱基突变导致232位的赖氨酸残基突变为中性疏水性的丙氨酸残基，命名为K232A 。研究表明，K基因能增加荷斯坦奶牛乳脂率、乳蛋白率及乳脂量，而A基因对提高产乳量和乳蛋白量有作用；DGAT1基因启动子区及其他区域突变对产乳性状也有一定影响。另外，DGAT1基因突变也影响肉牛肌内脂肪含量及猪的脂肪沉积和背膘厚。

高乳脂率是牦牛乳的主要特征，近年来对牦牛乳蛋白的分子遗传报道较多，但对其乳脂性状的遗传机制研究较少。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种检测DGAT1基因突变的PCR-SSCP引物及其在牦牛乳品质预测和鉴别方法中的应用。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种检测DGAT1基因突变的PCR-SSCP引物对，所述PCR-SSCP引物对的正向引物的核苷酸序列为序列表中的SEQ ID NO.1，反向引物的核苷酸序列为序列表中的SEQ ID NO.2。

本发明的第二个目的是提供了上述PCR-SSCP引物对在检测DGAT1基因突变中的应用。

本发明的第三个目的是提供了上述PCR-SSCP引物对在牦牛乳品质预测和鉴别中的应用。

本发明的第四个目的是提供了一种用于预示牦牛乳品质的PCR-SSCP检测试剂盒，所述试剂盒中包括有PCR-SSCP引物对的正向引物、反向引物、牦牛DGAT1*A的DNA标准样和牦牛DGAT1*B的标准样，所述PCR-SSCP引物对的正向引物的核苷酸序列为序列表中的SEQID NO.1，反向引物的核苷酸序列为序列表中的SEQ ID NO.2；所述牦牛DGAT1*A的DNA标准样的核苷酸序列为序列表中的SEQ ID NO.3，牦牛DGAT1*B的DNA标准样的核苷酸序列为序列表中的SEQ ID NO.4。

本发明的第五个目的是提供了一种牦牛乳品质的鉴别方法，包括以下步骤：