[发明专利]肿瘤组织3D培养方法及培养液

说明书

本发明公开了一种适用于多种肿瘤组织的肿瘤组织3D培养方法，包括步骤为：1）向孔板中滴加水凝胶，将剪切好的肿瘤组织块移至所述水凝胶中，滴加培养液，CO₂培养箱内静置使所述水凝胶凝固；2）向孔板中加入培养液进行培养，再取出培养后的所述肿瘤组织块并固定；所述培养液包括的组分有Advanced DMEM/F12培养液、1×GlutaMAX、表皮细胞生长因子EGF、成纤维细胞生长因子FGF10、N‑乙酰‑L‑半胱氨酸NAC、前列腺素E2 PGE2、Nicotinamide和50×B27。此外本发明还公开了一种肿瘤组织3D培养液。本发明方法适用于多种肿瘤组织，能更快、更准确地评价抗肿瘤药物的药效，弥补细胞2D培养和动物实验评价方法的不足，为临床药物研究和新药研发提供了更加便捷经济的模型方法。

技术领域

本发明涉及生物学领域，特别是涉及一种肿瘤组织3D培养方法；此外，本发明还涉及一种肿瘤组织3D培养液。

背景技术

世界癌症报告估计，2012年中国癌症发病人数为306.5万，约占全球发病的五分之一；癌症死亡人数为220.5万，约占全球癌症死亡人数的四分之一。由于人口老龄化等原因，当前我国癌症发病率、死亡率呈持续增长趋势。目前在癌症的治疗当中，药物治疗占据了60%，仍是肿瘤的主要治疗方案。然而，在现有的标准化药物治疗中，70%的病人均为无效治疗，并且在癌症的治疗过程中，还存在着严重的过度化疗现象，这种过度或不合理的治疗方案，至少促使了15%的癌症患者加速死亡。因此，精准化医疗逐渐成为了未来肿瘤医学研究与应用的趋势。

由于复杂的肿瘤异质性及肿瘤细胞和微环境的相互作用，肿瘤患者对于目前常规化疗药物的敏感性存在着极大差异，而目前辅助精确化诊疗实施的主要方法是基因测序和生物分子的标记，缺乏针对于传统化疗药物的有效筛查方法。

虽然临床上已开展了个体化药物评价实验，但所采用的方法依然是传统的2D细胞模型和动物模型实验。目前使用的动物评价体系，大多都是人肿瘤组织在裸鼠皮下成瘤体系（PDX模型），该模型成本高，成瘤时间长，并不适用于临床治疗方案的筛选，另外由于人鼠之间较大的种属差异，有时动物实验结果并不能准确反映药物在人体内的代谢情况和药效作用。与体内肿瘤相比，而常用的肿瘤细胞系模型与体内肿瘤相比，缺乏肿瘤组织的基因突变现象，肿瘤细胞系的2D培养也不具备肿瘤生长时所处的微环境条件，缺少体内某些特殊因子的刺激和蛋白调控作用，无法模拟体内肿瘤生长的真实环境，而采用原代肿瘤细胞，一是原代细胞分离过程繁琐耗时，而是由于缺乏相关的基质成分、细胞因子、免疫细胞，仍旧无法准确反应人体内，肿瘤对化疗药物的敏感性和耐受性。目前存在的一些多细胞共培养体系，仍旧缺乏复杂的脉管系统，而体内这些脉管系统能够通过简单扩散为组织提供氧、营养物质并清除废物，由于这一缺陷，使其在研究抗肿瘤药物药效学研究中仍具有一定不足。