[发明专利]一种真菌来源的酸性蛋白酶g412及其基因和应用

说明书

本发明涉及基因工程领域。具体地，本发明涉及一种来源于真菌的酸性蛋白酶g412及其基因和应用，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。本发明的酸性蛋白酶具有良好的性质，可作应用于食品、饲料、医药等工业。根据本发明的技术方案就可以实现利用基因工程手段生产性质优良适合工业应用的蛋白酶。

技术领域

本发明涉及基因工程领域。具体地，本发明涉及一种来源于真菌的酸性蛋白酶g412、及其基因和应用。

背景技术

蛋白酶是催化蛋白质水解的一类酶，在食品、洗涤、制革等工业都有广泛应用。微生物源蛋白酶成为了目前的蛋白酶的重要来源。蛋白酶的分类方式有很多，按照其作用的pH将其分成酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶；按活性中心可将蛋白酶分为四类：丝氨酸蛋白酶、天门冬氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶和金属蛋白酶。天冬氨酸蛋白酶是一类在酸性pH下有活性的蛋白水解酶。

蛋白酶在食品、酿造、毛皮与皮革、医药和饲料等行业中均有广泛应用。饲料中酸性蛋白酶的添加可提高蛋白质的可消化性，使高分子的蛋白质降解为低分子的肽及氨基酸，易于畜禽消化吸收，可降低饲料对幼仔消化道的刺激，减少营养障碍，提高饲料利用率，促进畜禽生长。

目前大多数酸性蛋白酶的性质不尽如人意，酶活不是很高，给工业化生产和食品加工带来极大的浪费，也在一定程度上限制了其应用范围。由于酶自身最适作用条件与所催化的环境条件之间的差别(如pH、温度等)，导致酶的催化效率降低，使其工业应用受到限制。用于工业化生产的酸性蛋白酶大多为霉菌酸性蛋白酶，此类酶的最适作用pH值为3.0左右，当pH值升高时，酸性蛋白酶的酶活会明显降低，且此类酶不耐热，当温度达到50℃以上时很不稳定，从而限制了酸性蛋白酶的应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种酸性蛋白酶。

本发明的再一目的是提供上述蛋白酶的基因。

本发明的再一目的是提供包含上述蛋白酶的重组载体。

本发明的再一目的是提供包含上述蛋白酶基因的重组菌株。

本发明的再一目的是提供一种制备蛋白酶的方法。

本发明的再一目的是提供上述蛋白酶的应用。

本发明首先所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种性质优良的、适合于在食品、饲料、医药等行业中应用的新的蛋白酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1：

其中，该酶全长394个氨基酸，N端26个氨基酸为信号肽序列，即“MVVFSKVTAVVAGLSVMASAVPTSNA”。

因此，成熟的蛋白酶g412的理论分子量为38.9kDa，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2：

该蛋白酶的最适pH为3.0，在pH 2.5-pH 3.5范围内，该酶能够维持其70％以上的酶活力；最适温度55℃，在60℃时依然具有80％以上的酶活力。

本发明还提供了编码上述蛋白酶的基因。DNA全序列分析结果表明，蛋白酶g412结构基因全长为1494bp，含有3个内含子，本发明通过PCR的方法分离克隆了这个蛋白酶基因g412，蛋白酶g412的cDNA全长为1182bp，其序列如SEQ ID NO.4所示：

其中，信号肽的碱基序列为：

因此，成熟蛋白酶的编码序列如SEQ ID NO.5所示：