[发明专利]一种蛋白芯片稳定剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物制剂技术领域，涉及一种蛋白芯片稳定剂及其制备方法和应用。

背景技术

生物芯片技术是20世纪末期产生的高通量平行检测技术，它一经产生就显示了极大的优势。而蛋白质微阵列近年来也发展迅速，已经应用于TORCH感染病原体和过敏原的检测。目前有研究采用芯片的方法对15种自身抗体进行检测，发现蛋白芯片的检测灵敏度和特异度均和ELISA实验相当，也有研究用芯片对18种抗原的稀释血清检测到自身抗体，特异度和灵敏度也很高，而且可以达到40fg的检测下限。但是市场上的蛋白芯片稳定性差，保质期短，制作工艺繁琐并且成本高。

蛋白一般都是很高浓度在-80℃以液态形式保存一年甚至更长时间，但是商品化特别是用于医院的试剂盒一般都要求蛋白以固相形式在4℃或者室温25℃保存。并且为了减少误差，方便检测人员，一般都会以蛋白芯片的形式供应，但是这种蛋白芯片的蛋白是以固相形式附着于芯片上，而且蛋白浓度较低，稳定性差，保存期短。目前市场有通过甘油封闭蛋白芯片来延长蛋白芯片保存期，但结果并不理想。为了适应市场的需要，使试剂盒中在保存期内蛋白芯片的蛋白免疫活性不发生变化，故发明配方简单，价格低廉，适用范围广泛，不存在安全性隐患、具有良好的稳定效果的蛋白芯片稳定保存配方。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种蛋白芯片稳定剂及其制备方法和应用。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

一方面，本发明提供一种蛋白芯片稳定剂，所述蛋白芯片稳定剂为在PBS缓冲体系中包括蔗糖、牛血清白蛋白、Tween-20、海藻糖和生物防腐剂Proclin300。

在本发明中，利用蔗糖、牛血清白蛋白、Tween-20、海藻糖和生物防腐剂Proclin 300组成PBS缓冲体系的生物制品稳定剂，该稳定剂可以提高蛋白芯片的稳定性，可以更好地延长蛋白芯片的保存期，又能够节约成本，并且安全有效，不含有其他化学类制品，不会对生物制品后续应用产生不利的影响。

优选地，在所述蛋白芯片稳定剂中，所述蔗糖的质量百分含量为1-6％，例如1％、1.3％、1.6％、2.1％、2.7％、3.4％、3.7％、4％、4.5％、5％、5.4％或6％，优选2-5％，进一步优选4％。

在本发明中，蔗糖属于非还原性二糖，自身的化学及生物性质非常稳定。目前，蔗糖在生物技术领域的主要应用集中于蛋白等生物活性物质的保护剂方面。糖类作为保护剂，其保护作用与它们的化学结构有密切关系。它们通常具有5个以上的羟基，可以与蛋白质形成氢键以取代水，保证了蛋白质的稳定性；在溶液中它们易结合水分子，发生水合作用，减少了游离水的含量并增加了溶液的粘性，从而减缓晶核的生长过程，使形成的冰晶较细小，以达到保护的目的。

优选地，在所述蛋白芯片稳定剂中，所述牛血清白蛋白(BSA)的质量百分含量为0.5-3％，例如0.5％、0.7％、0.9％、1％、1.2％、1.5％、1.8％、2％、2.2％、2.4％、2.6％、2.8％或3％，优选1-1.5％，进一步优选1％。牛血清白蛋白量过多(>5％)，会影响背景(空白)信号，使背景信号增高，影响测定准确性，如果牛血清白蛋白量过少，则起不到保护作用。

在本发明中，牛血清蛋白作为稳定剂的另一种配方，同样具有提高稳定性的作用。蛋白质在高浓度下保存时一般不易降解，理想的浓度为1mg/ml或更高。因此在抗体溶液中加入BSA作为稳定剂，以用来提高抗原抗体的稳定性，特别是低浓度的抗原抗体。

优选地，在所述蛋白芯片稳定剂中，所述Tween-20(吐温-20)的质量百分比含量为0.02-0.1％，例如0.02％、0.04％、0.05％、0.07％、0.08％、0.09％或0.1％，优选0.04-0.08％，进一步优选0.05％。

在本发明中，吐温-20作为一种非离子表面活性剂，具有乳化、扩散、增溶、稳定等作用。

优选地，在所述含蛋白芯片稳定剂中，所述海藻糖的质量百分比含量为2-8％，例如2％、2.7％、3％、3.8％、4.5％、5％、5.6％、6.3％、6.8％、7.4％、或8％，优选3-5％，进一步优选5％。

在本发明中，海藻糖是由两个葡萄糖分子以α,α,1,1-糖苷键构成的非还原性二糖，自身的化学及生物性质非常稳定。并且含有海藻糖的封闭液对预包被板条抗原、抗体以及酶标记抗体稳定性有非常好的保护作用。另外海藻糖在对抗高温影响蛋白活性方面具有明显的效果。