[发明专利]一种用于文物检测的棉纤维素酶解产物偶联蛋白质的制备方法

权利要求书

1.一种用于文物检测的棉纤维素酶解产物偶联蛋白质的制备方法，其特征在于，以g、mL计，包括以下步骤：

1）取9-11 g棉纤维，研磨成粉，加入45-55 mL苯，20-30 mL乙醇浸泡处理，对纤维进行脱脂处理，处理结束后对混合溶液进行减压蒸发以回收苯和乙醇，脱脂后的棉纤维用去离子水冲洗，烘干后得到棉纤维粉末；

2）取4-6g步骤1）烘干后的棉纤维粉末，加入180-220 mL的4-6wt%乙酸，在70-80 ℃的水浴中加热10-14 h后抽滤，取沉淀，用去离子水洗涤后加入180-220mL的7-9wt%的氢氧化钠，在70-80℃的水浴中加热10-14 h后抽滤，将沉淀用去离子水冲洗；

3）取步骤2）中所得沉淀，加入浓度为8-12wt%过氧化氢溶液，在40-50℃水浴中加热4-6h后抽滤，将沉淀用去离子水冲洗，烘干后得到纤维素粉末；

4）取2-3g步骤3）所得纤维素粉末，加入70-80mL去离子水，称量0.4-0.6 g的纤维素酶和0.1-0.3 g的β-葡萄糖苷酶加入至溶液中后调节pH为4-5，进行酶解反应7-9h；

5）移取8-12 mL聚乙二醇-400至烧杯中，接着加入4-6 mL去离子水，最后加入8-12 mL预先配好的30wt%硫酸铵溶液，搅拌均匀后于1-5 ℃下储存，制得萃取液；

6）酶解反应结束后，在剩余溶液中加入20-30mL萃取液，搅拌混合均匀后置于1-5 ℃环境中7-9h，然后对溶液进行离心处理，离心后溶液分层，分别收集上下层液相进行真空冷冻干燥，上层有机相冻干后得到酶，可以重复利用，下层溶液冻干后得到葡萄糖粉末；

7）取0.15-0.25 g牛血清蛋白和0.8-1.2 g步骤6）所得葡萄糖粉末溶于18-22mL去离子水中，搅拌均匀后进行真空冷冻干燥，冻干后所得粉末溶于25-35 mL饱和溴化钾溶液并在55-65℃，相对湿度60-70%的恒温恒湿箱中放置6-8天；

8）对步骤7）中所得溶液进行真空冷冻干燥，最终获得葡萄糖-牛血清蛋白偶联物。

2.如权利要求1所述的一种用于文物检测的棉纤维素酶解产物偶联蛋白质的制备方法，其特征在于，步骤1）中，研磨时间为3-5min，浸泡时间为6-10h，烘干温度为45-55℃。

3.如权利要求1所述的一种用于文物检测的棉纤维素酶解产物偶联蛋白质的制备方法，其特征在于，步骤3）中，沉淀与过氧化氢溶液的料液质量比为1:25-35，烘干温度为45-55℃。

4.如权利要求1所述的一种用于文物检测的棉纤维素酶解产物偶联蛋白质的制备方法，其特征在于，步骤4）中，纤维素酶和β-葡萄糖苷酶的酶活为10000 u/g。

5.如权利要求1所述的一种用于文物检测的棉纤维素酶解产物偶联蛋白质的制备方法，其特征在于，步骤6）中，离心速率为10000-14000 r/min。