[发明专利]一种用于检测肌红蛋白的测定试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测肌红蛋白的测定试剂盒，其特征在于，试剂盒包括包被有肌红蛋白抗体的纳米磁微粒、酶标记的肌红蛋白抗体、肌红蛋白校准品、化学发光底物，所述纳米磁微粒的粒径为40nm，所述酶为辣根过氧化物酶；

其中，包被有肌红蛋白抗体的纳米磁微粒的制备方法包括：将纳米磁微粒与活化剂在缓冲溶液中接触，然后与肌红蛋白抗体偶联得到包被有肌红蛋白抗体的纳米磁微粒，所述活化剂为碳二亚胺；

包被有肌红蛋白抗体的纳米磁微粒的制备方法包括：

1）将纳米磁微粒用MES 缓冲液分散，使纳米磁微粒的终浓度为30mg/mL；

2）将碳二亚胺加入至步骤1）的溶液中，搅拌加入肌红蛋白抗体，室温下搅拌过夜；

3）将纳米磁微粒与反应体系分离后用MES缓冲液分散，加入1％BSA封闭液，室温封闭反应2~4小时，将纳米磁微粒分离；

4）将步骤3）分离的纳米磁微粒用pH7.4的Tris-HCl缓冲液分散，使纳米磁微粒的终浓度为18mg/mL，得到包被有肌红蛋白抗体的纳米磁微粒；

纳米磁微粒的制备方法包括以下步骤：

1）将纳米Fe₂O₃粉体分散于体积分数为50%的乙醇水溶液中，机械搅拌20~30 min，沉淀，分离，固相水洗，加入蒸馏水，调节 pH至5.5~6，加入油酸，65℃机械搅拌1小时，冷却至室温，磁分离，无水乙醇、去离子水反复洗涤除去游离的油酸，干燥得到改性的纳米Fe₂O₃磁性粉体；

2）将改性的Fe₂O₃磁性纳米粉与聚苯乙烯-聚丙烯酸加入到四氢呋喃中，机械搅拌的条件下缓慢滴加四氢呋喃1~3倍体积的水，搅拌反应2~3小时，静置，过滤，石油醚洗涤，干燥得纳米磁微粒；

所述酶标记的肌红蛋白抗体的制备方法包括步骤如下：

1）将辣根过氧化物酶溶解于蒸馏水中；

2）向步骤1）得到的溶液中加入0.1M NaIO₄溶液，室温下避光搅拌，得到混合溶液，并将其装入透析袋中用醋酸钠缓冲液透析过夜；

3）向步骤2）得到的透析液中加入碳酸盐缓冲液至pH值为7.5～8，加入肌红蛋白抗体，室温下搅拌反应8~10小时，然后加入NaBH₄溶液，混匀，静置反应，混合液转入透析袋中于PBS 缓冲液中搅拌过夜；

4）取出透析袋中的液体，加入饱和硫酸铵，离心，将沉淀物溶于PBS 缓冲液中并装入透析袋中透析取上清液即为酶标记的肌红蛋白抗体。

2.根据权利要求1所述的肌红蛋白测定试剂盒，其中，所述化学发光底物由化学发光液A液和B液组成，A液为含有0.7g/L的鲁米诺和0.165g/L的对碘酚的Tris-HCl缓冲液，pH为8.6；B 液为0.675g/L过氧化脲。