[发明专利]一种用于树突状细胞的细胞冻存液

说明书

本发明公开了一种用于树突状细胞的细胞冻存液，在RPMI‑1640培养液中添加有效量的冻存保护剂、细胞稳定剂和防沉剂均匀混合而成，冻存保护剂为二甲基亚砜，细胞稳定剂为人γ球蛋白；防沉剂为多聚‑L‑赖氨酸，多聚‑L‑赖氨酸的分子量范围为3‑7万；二甲基亚砜的体积百分浓度为1‑3％。本发明细胞冻存液用于冻存DCs时可以保证DCs的冻存复苏率和免疫活性，冻存1年内冻存复苏率和免疫活性无明显降低；人γ球蛋白为细胞稳定剂，可以维持DCs的免疫活性；多聚‑L‑赖氨酸为防沉剂，避免储存过程人γ球蛋白向冻存液底部沉降，同时，多聚‑L‑赖氨酸具有部分冻存保护剂的作用，还有助于维持DCs的免疫活性。

技术领域

本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种用于树突状细胞的细胞冻存液。

背景技术

临床常需大量成熟的树突状细胞(DCs)，但机体内天然DCs含量少，难以满足临床应用的需要，只能通过体外培养大量获得。成熟DCs需要大量细胞因子维持，花费高、易污染，不利于DCs的临床应用，因此可将制备出的DCs冷冻保存，需要时复苏即可。

为了保持冻存DCs的复苏率和免疫活性，选择合适的冷冻保存方法极其重要。

目前，DCs的冻存方法是采用含有10％二甲基亚砜(DMSO)、20％胎牛血清(FCS)的冻存液二步降温。这种方法存在两个明显的不足：

第一，FCS成分复杂，会向DCs中引入污染物和致病原，安全性不易把控；目前有进口冻存液不含FCS(如日本ZENOAQ公司生产的Cellbanker细胞冻存液)，但是价格昂贵，应用成本过高，限制了其在临床中的使用，尤其是发展中国家和不发达国家；

第二，虽然DMSO是常用的冻存保护剂，但这不代表其不会对细胞造成冻存损伤(深低温时DMSO的细胞毒性受到抑制，复苏时动作要快，尽快洗掉二甲基亚砜，否则会造成对细胞严重的毒；但是，本领域技术人员知道，速度再快，细胞毒不可避免)，这种损伤限制了复苏率的进一步提高；除非开发新的可以替代DMSO的试剂或降低DMSO的比例。

为了降低DCs的冻存成本，打破进口冻存液的垄断，申请人致力于开发拥有自主产权的DCs冻存液，在保证DCs冻存复苏率和免疫活性的前提下降低成本。

发明内容

本发明旨在降低DCs的冻存成本，打破进口冻存液的垄断，提供一种经济、实用、高效的DCs冻存液，在保证DCs冻存复苏率和免疫活性的前提下降低成本。

本发明通过如下技术方案得以实现：

一种基于RPMI-1640培养液的细胞冻存液，在RPMI-1640培养液中添加有效量的冻存保护剂、细胞稳定剂和防沉剂均匀混合而成，冻存保护剂为二甲基亚砜，所述细胞稳定剂为人γ球蛋白；所述防沉剂为多聚-L-赖氨酸，多聚-L-赖氨酸的分子量范围为3-7万；所述二甲基亚砜的体积百分浓度为1-3％。

优选地，人γ球蛋白的质量浓度为8-12μg/mL。

优选地，所述多聚-L-赖氨酸在细胞冻存液中的质量浓度为20-30μg/mL。

优选地，该细胞冻存液中还含有抗生素。

优选地，抗生素为庆大霉素，浓度为50U/mL。

上述细胞冻存液在树突状细胞冻存方面的应用。

本发明优点：