[发明专利]一种利用杆状病毒表达外源蛋白的方法及其应用有效
| 申请号： | 201710633480.9 | 申请日： | 2017-07-28 |
| 公开（公告）号： | CN109306360B | 公开（公告）日： | 2022-07-15 |
| 发明（设计）人： | 田克恭;张海洋;孙进忠;张许科 | 申请（专利权）人： | 普莱柯生物工程股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/866 | 分类号： | C12N15/866 |
| 代理公司： | 北京华夏正合知识产权代理事务所(普通合伙) 11017 | 代理人： | 韩登营 |
| 地址： | 471000 *** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 杆状病毒 表达 蛋白 方法 及其 应用 | ||
1.一种杆状病毒表达外源蛋白的方法，包括如下步骤：
步骤(1)细胞的培养：将昆虫细胞经传代、加入培养基培养所述昆虫细胞，形成生长良好的细胞单层；
步骤(2)病毒接种与吸附：将重组有外源蛋白基因的重组杆状病毒接种于所述步骤(1)中所述的细胞单层，进行病毒吸附；
步骤(3)细胞的孵育：待所述步骤(2)所述重组杆状病毒吸附完成后，加入D-氨基葡萄糖进行细胞孵育；
步骤(4)外源蛋白的表达：待所述步骤(3)所述细胞孵育完成后，将D-氨基葡萄糖洗去，加入培养基培养细胞以扩增重组杆状病毒、表达外源蛋白；以及
步骤(5)收获所述表达的外源蛋白：收集培养基中所述表达的外源蛋白。
2.根据权利要求1所述方法，其中，所述步骤(1)中所述昆虫细胞为sf21、sf9、或Highfive细胞。
3.根据权利要求1所述方法，其中，所述步骤(1)中所述昆虫细胞为High five细胞。
4.根据权利要求1所述方法，其中，所述步骤(3)中所述D-氨基葡萄糖细胞孵育时间为40～80分钟。
5.根据权利要求1所述方法，其中，所述步骤(3)中所述D-氨基葡萄糖细胞孵育时间为60分钟。
6.根据权利要求1所述方法，其中，所述步骤(3)中所述细胞孵育中D-氨基葡萄糖浓度为30mM～80mM。
7.根据权利要求1所述方法，其中，所述步骤(3)中所述细胞孵育中D-氨基葡萄糖浓度为40mM～70mM。
8.根据权利要求1所述方法，其中，所述步骤(1)和步骤(4)中所述培养基为IB905SFMpro、Sf-900ⅡSFM、或Insect-XPRESSTM培养基。
9.根据权利要求1所述方法，其中，所述步骤(2)中所述外源蛋白包括禽腺病毒Penton蛋白、禽腺病毒Fiber-2蛋白、禽减蛋综合征病毒Penton蛋白、禽减蛋综合征病毒Fiber蛋白、鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白、猪圆环病毒3型Cap蛋白、猪圆环病毒2型Cap蛋白、猪伪狂犬病病毒gB蛋白、猪伪狂犬病病毒gD蛋白、猪细小病毒VP2蛋白、猪瘟病毒E2蛋白、牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白、牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白、口蹄疫病毒VP0蛋白、口蹄疫病毒VP3蛋白、口蹄疫病毒VP1蛋白、兔瘟病毒VP60蛋白。
10.根据权利要求1～9所述方法在制备外源蛋白中的应用。
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