[发明专利]一种脂肪干细胞培养基及其应用

说明书

本发明提供了一种脂肪干细胞培养基，包括基础培养基和添加剂，添加剂为溶血磷脂酸(LPA)或1‑磷酸鞘氨醇(S1P)中的一种或两种。本发明针对现有脂肪干细胞体外培养方法中使用的培养基进行优化，与现有产品相比，添加了特殊的LPA及S1P成分。体外实验及体内试验表明，在脂肪干细胞的培养过程中单独或同时添加LPA或S1P均能够提高干细胞抵抗逆境生长压力的能力，同时能够保证脂肪干细胞的持续增值，并维持脂肪干细胞的表型和功能的稳定。本发明在脂肪干细胞体外培养的增值效率、表型稳定性及安全性方面达到了现有培养体系水平，同时由于极大提高了移植后治疗急性肝损伤和酒精肝的效率，使所培养的脂肪干细胞更适用于在多种疾病的干细胞移植临床治疗中使用。

技术领域

本发明涉及干细胞培养技术领域，更具体地，涉及一种脂肪干细胞培养基及其应用。

背景技术

药物、毒素或酒精引起的急性或慢性肝损伤是世界范围内严重的临床问题，例如，每年约有10%的急性肝炎病例为药物性肝损伤。在美国，据报道有1510万名成年人患有酒精滥用，其中包括980万名男性和530万名女性。据估计每年有88000人死于酒精引起的疾病。这些药物/毒素或酒精引起的肝损伤可能进展为肝功能衰竭，需要及时的肝移植。

由于再生医学的快速发展，干细胞移植成为一种很有前途的治疗药物、毒素、酒精引起的严重肝损害的有效策略，以解决肝移植过程中的诸多问题，如供体器官不足，排斥反应和感染等。现今临床上干细胞移植主要应用于代谢性肝病，也用于急性肝功能衰竭和终末期肝病。

脂肪干细胞是由中胚层发育而来的多能干细胞，能够被诱导分化为多种细胞，包括同样中胚层来源的成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞。还可以跨胚层分化为内胚层来源的肝细胞、胰岛β样细胞，外胚层来源的神经细胞、心肌细胞、表皮细胞等。与其他间充质干细胞相比，脂肪干细胞来源丰富，取材简便，是优秀的组织工程与细胞治疗的种子细胞。研究表明脂肪干细胞在肝组织损伤修复过程中能够起到治疗性作用。

然而在临床实践过程中，干细胞移植疗法仍需要克服几个主要问题，如移植治疗所需干细胞数量相对较大，且对干细胞移植后的融合率及细胞功能的保持要求颇高。而移植环境中的炎症和氧化损伤等因素使得移植后脂肪干细胞死亡率高、不容易成活，移植的细胞不能很好地融入宿主组织，或者在成功融合后短时间内消失。研究表明，在干细胞的体外培养及增值过程中如能增强细胞抵抗氧化应激和炎症的能力，则在如急性肝衰竭和心肌梗死等多种疾病模型的移植治疗过程中疗效显著提高。

现有移植治疗用干细胞培养过程中为增强细胞增殖能力，多选择补充不同种类和浓度的生长因子（如HGF、EGF、PDGF、VEGF、TGF-β等）或其他信号通路激活、抑制分子，从而加快脂肪干细胞的增殖及移植后存活能力。而缓解炎症及氧化压力方面则多使用抗氧化剂。然而，这些生长因子或小分子成分的加入，一定程度上将影响移植治疗用干细胞的表型和移植后的稳定性，且未能显著增加移植后的干细胞抗逆境生长环境的能力及移植治疗效果，较难直接应用于临床治疗。因此，如何建立稳定高效的扩增体系，保持干细胞的生理特性和移植后稳定的修复作用是临床用干细胞培养中亟待解决的问题。

发明内容

本发明根据现有技术中的不足，提供了一种脂肪干细胞培养基。

本发明另外提供了上述脂肪干细胞培养基在用于移植治疗急性肝损伤和/或酒精肝的脂肪干细胞培养中的应用。

本发明针对现有脂肪干细胞体外培养方法中使用的培养基进行了优化，添加了特有的LPA及S1P成分，在保证脂肪干细胞体外生长、维持了脂肪干细胞的表型和功能的稳定的同时，显著增加了干细胞体外培养抗逆境的能力，以及移植后治疗急性肝损伤和酒精肝的效率，使所培养的脂肪干细胞更适用于在多种疾病的干细胞移植临床治疗中使用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种脂肪干细胞培养基，包括基础培养基和添加剂，添加剂为溶血磷脂酸或1-磷酸鞘氨醇中的一种或两种。