[发明专利]促进罗汉果SS基因表达的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物生物领域。更具体地说，本发明涉及一种促进罗汉果SS基因表达的方法。

背景技术

罗汉果甜苷V萃取于广西特产经济植物——罗汉果，其甜度为蔗糖的300倍，其热量为零，具有清热润肺镇咳、润肠通便之功效，对肥胖、便秘、糖尿病等具有防治作用，目前市场对罗汉果甜苷V的需求量较大，因此需要提高种植效率来提高罗汉果甜苷V的产量以满足市场的需要。罗汉果甜苷V属于葫芦烷型四环三萜类物质，本课题组前期根据罗汉果转录组数据，已推导出甜苷V可能的生物合成途径。罗汉果甜苷V生物合成的前体物质是异戊烯二磷酸(IPP)和3,3-二甲基烯内基焦磷酸(DMAPP)，二者是通过甲羟戊酸(MVA)和甲基赤藓糖醇磷酸化(MEP)两条途径形成，MVA途径发生在胞质中，MEP途径发生在质体中。来源于上述两途径的IPP或DMAPP经牻牛儿基焦磷酸合酶(GPS)催化形成牻牛儿基焦磷酸(GPP)，IPP与GPP在法呢基焦磷酸合酶(FPS)的催化作用下进而形成法呢基焦磷酸(FPP)，然后经角鲨烯合酶(SS)的催化形成角鲨烯，角鲨烯环氧化酶(SE)进一步催化形成2,3-氧化角鲨烯，最后在葫芦二烯醇合酶(CS)、CYP450酶和葡萄糖基转移酶的作用下，形成罗汉果甜苷V。

异戊二烯类物质的产生受到限速酶活性的严格调控，一直被认为在其生物合成途径中起着重要的调控作用。作为异戊二烯途径中的限速酶，SS基因的表达对罗汉果甜苷V的生物合成起着决定性作用。过表达SS基因，可以促进罗汉果甜苷V的积累；相反，如果抑制SS基因的表达，罗汉果甜苷V的产量将显著降低。现有技术中未见有促进罗汉果SS基因表达的报道。

发明内容

本发明的一个目的是解决罗汉果甜苷V的产量不高的问题，并提供至少后面将说明的优点。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种促进罗汉果SS基因表达的方法，将罗汉果组培苗接种在茉莉酸甲酯浓度为260-345μmol/L的诱导培养基中培养28-30d。

优选的是，将罗汉果组培苗置于湿度60-66％、光照强度1400lux，光照时间8h/d，温度23±2℃条件下培养。

优选的是，上述步骤中用体积分数为2％的乙醇水溶液溶解茉莉酸甲酯配制成茉莉酸甲酯母液，并用微孔滤膜灭菌，灭菌后冷却至24-26℃，再将冷却后的茉莉酸甲酯母液添加到固体培养基中，至茉莉酸甲酯最终浓度为260-345μmol/L，得到诱导培养基。

优选的是，所述固体培养基组分为：MS+6-BA 1.5mg/L+吲哚丁酸0.3mg/L+琼脂3.5g/L+蔗糖30g/l+活性炭1.0g/L。

优选的是，用体积分数为2％的乙醇水溶液溶解茉莉酸甲酯，将茉莉酸甲酯配成浓度为260-345μmol/L的茉莉酸甲酯溶液，喷洒于授粉后20-30d的罗汉果表面，每次喷洒至罗汉果表面滴水为止，每天喷洒三次，每隔4-6h喷洒一次，连续喷施4-6d。

优选的是，在罗汉果幼苗移栽后20-30d，将浓度为300-500mg/L的调节磷溶液，用超声波进行处理20-30min，超声频率为25-35kHz，用黑棉布将罗汉果幼苗的上半部分包裹住，同时用遮阴布对罗汉果幼苗进行遮阴，将经过超声处理的调节磷溶液持续滴于黑棉布上，持续时间为2-3h；取下黑棉布，同时去掉遮阴布，6-8h后取质量浓度为0.6-0.9％的水仙素溶液，将水仙素溶液用超声波进行处理20-25min，超声频率为25-32kHz，再用黑棉布将罗汉果幼苗的上半部分包裹住，同时用遮阴布对罗汉果幼苗进行遮阴，将经过超声处理的水仙素溶液持续滴于黑棉布上，持续时间为1.5-2h，之后取下黑棉布，去掉遮阴布；每隔3天对罗汉果幼苗进行处理一次，共处理10次。

优选的是，取粉煤灰25-30重量份、尿素10-15重量份、死鱼20-25重量份、葡萄皮5-10重量份、草木灰10-15重量份、变质果汁4-8重量份以及稀土粉1-3重量份，将死鱼20-25重量份、葡萄皮5-10重量份以及变质果汁4-8重量份倒于发酵罐中，再加入25-35重量份的水进行发酵，发酵完成后，取出与粉煤灰25-30重量份、尿素10-15重量份、草木灰10-15重量份以及稀土粉1-3重量份混合均匀，制成混合肥，从罗汉果植株花期开始，将该混合肥埋于罗汉果植株根部周围，每株埋0.2-0.5kg，再浇上经过磁化的水，之后用磁场强度为120-190mT的磁场对植株的根部进行处理，每次处理5-10min，每隔1h处理一次，共处理三次。

本发明至少包括以下有益效果：