[发明专利]制备融合蛋白的方法

权利要求书

1.一种制备融合蛋白的方法，其结构通式表示为K1-L-K2，所述融合蛋白包含第一种生物活性分子K1、第二种生物活性分子K2和连接肽L，且组成所述融合蛋白的各部分自N端至C端首尾依次相连，K1选自细胞因子、生长因子、激素、酶、受体以及对于受体具有配体功能的蛋白或者多肽，K2为延长循环半衰期的血清蛋白或蛋白结构域，且选自抗体/免疫球蛋白Fc片段，所述方法包括可以使生物活性分子K1和K2通过连接肽L相连接的步骤，其特征在于，所述连接肽L由柔性肽和刚性肽组成；所述连接肽L的氨基酸序列如SEQ ID NO：2、3、5或7所示。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物活性分子K1选自表皮生长因子EGF及受体家族、凝血因子IIa、因子VII、因子VIII、因子IX、成纤维细胞生长因子FGF及受体家族、促卵泡激素、胰高血糖素、生长激素、胰岛素样生长因子IGF及结合蛋白家族、白细胞介素IL超家族及其受体超家族、干扰素IFN家族、甲状旁腺激素、促甲状腺激素、促甲状旁腺激素、肿瘤坏死因子TNF超家族及其受体TNFRSF超家族、血管内皮生长因子VEGF及其受体家族；所述生物活性分子K2选自人抗体/免疫球蛋白Fc片段。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc片段的氨基酸序列如SEQID NO：8、9、10、11或12所示。

4.如权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(a)将编码所述融合蛋白的第一种生物活性分子K1和第二种生物活性分子K2的DNA序列通过连接肽L的DNA序列连接组成融合基因；

(b)将步骤(a)中获得的融合基因引入DHFR酶缺陷型CHO宿主细胞；

(c)培养步骤(b)筛选到的高产量表达宿主细胞，表达融合蛋白；

(d)收获步骤(c)得到的发酵液，并分离纯化融合蛋白。