[发明专利]蔓越桔的化学成分标准指纹图谱及其构建方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及植物化学成分指纹图谱技术领域，具体涉及蔓越桔的一种化学成分标准指纹图谱及其构建方法、应用。

背景技术

蔓越桔(Vacciniium macrocarpon)是杜鹃花科(Ericaceae)越桔属(Vaccinium spp.)植物，是全球新兴的第三代保健浆果，风靡北美、南美和欧洲，它是一种生长在矮藤上、小而圆、表皮富于弹性的鲜红果子，也有人称它为小红莓。蔓越桔需要特殊的环境及气候条件栽培，全球的蔓越桔产区较少，产量有限，又因其具有多种保健功能，从而具有“北美红宝石”之美称。蔓越桔与葡萄、蓝莓并称为北美三大水果，对大多数中国人而言尚且陌生，不过，在学术界却早已盛名在外。蔓越桔一直就是北美地区的一种传统健康食品，近20年来，一系列科学研究证实了蔓越桔的各种保健作用，而且医学调查也表明，蔓越桔制剂已经成为预防尿路感染的首选保健药物，探究其原因，主要是由于蔓越桔果实中富含特殊成分的抗氧化物质，如花青素等，且不同蔓越桔品种之间，花青苷含量具有明显差异。所以有必要构建一套蔓越桔标准的化学成分指纹图谱，用以区别或鉴定不同的蔓越桔品种。关于这方面的研究，在我国尚属空白。

化学成分指纹图谱技术作为近年来的一个研究热点，应用于许多物种且取得诸多研究成果。化学指纹图谱不仅能实现物种的种类鉴别、质量评价、加工工艺过程的质量控制和最终质量评价，同时在化学成分的测定等方面也具有广阔的应用前景。蔓越桔不同品种的化学成分指纹图谱构建，对于品种鉴定以及合理开发利用等方面均具有重要的理论价值。

发明内容

针对以上技术问题，本发明的目的在于提供蔓越桔的一种化学成分标准指纹图谱及其构建方法，用以区别或鉴定不同的蔓越桔品种，为今后定向应用蔓越桔品种提供理论依据。

本发明提供了一种获取蔓越桔化学成分指纹图谱的方法，包括如下步骤：

1)称50g±0.5g蔓越桔果实放入溶剂搅拌机中，加入50mL提取溶剂，匀化样品直至获得均质匀浆，时间不超过20秒；所述的提取溶剂为含有0.2％甲酸的甲醇，配制方法为：①移取2mL甲酸加入1L甲醇中，可获得1L该溶剂，②-20℃储存备用；

2)将布氏漏斗连接上真空泵，使匀浆穿过烧结玻璃漏斗，所得滤液即抽提液，将抽提液储存在棕色不透光的试剂瓶里，-20℃保存；

3)使用高效液相色谱(HPLC)，经过C18反相色谱柱分离，使用二极管阵列检测器(DAD)在525nm检测；

4)色谱分析条件：流速0.8mL·min–1，柱温35℃，进样体积10μL，200–800nm范围内全波长扫描吸收光谱，流动相A相为5％甲酸水(v/v)；B相为15％甲醇乙腈(v/v)；

5)线性洗脱程序：0min，5％B；40min，16％B；45min，5％B；

6)将蔓越桔各个品种的花青苷制成标准样品溶液在上述步骤3)、4)和步骤5)操作条件下注入进行梯度洗脱即得蔓越桔化学成分标准指纹图谱。

所述蔓越桔的花青苷抽提液来自蔓越桔的成熟果实。

本发明的有益效果为：采用本发明的方法获得的蔓越桔化学成分标准指纹图谱能够清晰地反应出蔓越桔各个花青苷成分的特征峰出峰位置，准确性以及清晰度很高，是一种快速、高效分析蔓越桔化学成分指纹图谱的新方法，有助于蔓越桔各个品种的辨别。

附图说明

图1为蔓越桔品种半蓝的HPLC化学成分标准指纹图谱。

图2为蔓越桔品种早黑的HPLC化学成分标准指纹图谱。

图3为蔓越桔品种朝圣者的HPLC化学成分标准指纹图谱。

图4为蔓越桔品种克劳利的HPLC化学成分标准指纹图谱。

图5为蔓越桔品种史蒂文的HPLC化学成分标准指纹图谱。

图6为蔓越桔品种博蔓(的HPLC化学成分标准指纹图谱。

图7为蔓越桔品种奥斯通的HPLC化学成分标准指纹图谱。

图8为蔓越桔品种森特维尔的HPLC化学成分标准指纹图谱。

图9为蔓越桔品种豪斯的HPLC化学成分标准指纹图谱。

具体实施方式

植物材料