[发明专利]一种免标记荧光适配体传感器及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种免标记荧光适配体传感器，其特征在于，包括磁性纳米微球、捕获探针和适配体，所述磁性纳米微球表面修饰有所述捕获探针，所述捕获探针与所述适配体通过碱基互补配对连接形成双链DNA；所述适配体的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述捕获探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

所述磁性纳米微球的直径为10～500nm；

所述磁性纳米微球为用聚合材料或二氧化硅包裹四氧化三铁纳米粒子的微球，其表面连接有活性基团；

所述聚合材料为聚苯乙烯、聚乙烯或聚氯乙烯。

2.根据权利要求1所述的免标记荧光适配体传感器，其特征在于，所述活性基团为-COOH、-NH2或-SH。

3.权利要求1～2中任意一条权利要求所述免标记荧光适配体传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将磁性纳米微球分散于含有捕获探针、磷酸盐缓冲液和偶联试剂的混合液中，使所述捕获探针通过其5’端活性基团与所述磁性纳米微球表面的活性基团通过共价键固定在所述磁性纳米微球的表面，得到组装有捕获探针的磁性纳米微球；

(2)将步骤(1)所得的组装有捕获探针的磁性纳米微球分散于含有适配体与Tris-HCl缓冲液的混合液中，95℃孵育5～10min，再冷却至室温，使所述捕获探针与所述适配体互补配对连接形成双链DNA，得到免标记荧光适配体传感器。

4.根据权利要求3所述免标记荧光适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述偶联试剂为乙基-N，N-二甲基丙基碳二亚胺、N-羟基丁二酰亚胺和4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐。

5.权利要求1～2中任意一条权利要求所述免标记荧光适配体传感器在虾致敏蛋白的检测中的应用。

6.一种快速检测虾致敏蛋白的方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：

(1)将免标记荧光适配体传感器与待测物在37℃下孵育，如待测蛋白中含有虾致敏蛋白，则适配体从双链DNA中脱离，并与待测物中的虾致敏蛋白形成复合物；

(2)磁分离，除去未形成复合物的免标记荧光适配体传感器；

(3)在步骤(1)所得复合物中加入荧光探针，根据产生的荧光信号定量分析，得到待测物中虾致敏蛋白的含量。

7.根据权利要求6所述的快速检测虾致敏蛋白的方法，其特征在于，所述荧光探针为OliGreen。