[发明专利]一种采用高效液相色谱法检测维生素C二步发酵法的发酵液中葡萄糖酸含量的方法

说明书

一种采用高效液相色谱法检测维生素C二步发酵法的发酵液中葡萄糖酸含量的方法，采用如下色谱条件：氨基色谱柱，紫外检测器，流动相为体积比为40:60～60:40的磷酸盐缓冲溶液与乙腈混合液，其中磷酸盐缓冲溶液浓度为1～4‰，流速0.5～1.5ml/min，柱温20～40℃，检测波长205～215nm，进样量20μl。具有重现性强、灵敏度高、准确度高等优点，可快速、准确地测定维生素C发酵液中葡萄糖酸的含量，为提高“二步发酵法”维生素C生产工艺发酵收率的研究提供指导。

技术领域

本发明涉及一种检测维生素C发酵液中葡萄糖酸含量的方法，特别是一种采用高效液相色谱法检测维生素C二步发酵法的发酵液中葡萄糖酸含量的方法。

背景技术

维生素C又称L-抗坏血酸，是人体必需的维生素，生理作用广泛，在医药和食品工业中均占有重要地位。目前国内普遍采用我国自主研发的“二步发酵法”生产，“二步发酵法”的第一步是单菌发酵，将D-山梨醇转化成L-山梨糖；第二步是混合菌发酵，通过普通生酮基古龙酸菌(俗称小菌)和巨大芽孢杆菌(俗称大菌)的共同作用将L-山梨糖转化成2-酮基 -L-古龙酸(2-KGA)。2-酮基-L-古龙酸再经过提取和转化生成维生素C。

为改善“二步发酵法”维生素C生产工艺第一、二步发酵效果，研究人员在培养基中加入葡萄糖，但葡萄糖有可能在发酵过程中转化成葡萄糖酸，从而对发酵带来一系列影响，为此需要迅速、准确地测定发酵液中葡萄糖酸的含量，以便采取针对性措施提高改善发酵效果，而“二步发酵法”维生素C生产工艺第一步单菌发酵发酵液中含有山梨醇和山梨糖，第二步混合菌发酵发酵液中含有山梨糖和古龙酸，这些物质与葡萄糖、葡萄糖酸性质相近，分离十分困难，常规的化学分析方法很难快速进行分析测定，因此需要建立一种新的专用检测方法，以快速、准确、方便地测定维生素 C发酵液中葡萄糖酸的含量。

经检索，未见有专用的、检测维生素C二步发酵法的发酵液中葡萄糖酸含量的方法的公开报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种专用的、采用高效液相色谱法检测维生素C二步发酵法的发酵液中葡萄糖酸含量的方法，以快速、准确、方便地测定维生素C二步发酵法的发酵液中葡萄糖酸的含量。

本发明的目的可以通过这样的技术方案来实现：

一种采用高效液相色谱法检测维生素C二步发酵法的发酵液中葡萄糖酸含量的方法，它采用如下色谱条件：

色谱柱：氨基色谱柱

检测器：紫外检测器

流动相：体积比为40:60～60:40的磷酸盐缓冲溶液与乙腈混合液，其中磷酸盐缓冲溶液浓度为1～4‰

流速：0.5～1.5ml/min

柱温：20～40℃

检测波长：205～215nm

进样量：20μl

是按下列步骤测定维生素C二步发酵法的发酵液中葡萄糖酸含量的：

一、制备供检发酵液溶液：精密量取维生素C二步发酵法的发酵液M ml，注入容量瓶中，加流动相稀释至10倍体积，摇匀，过滤，制成供检发酵液溶液；

二、制备对照品溶液：精密称取葡萄糖酸标准品N mg，加入容量瓶中，加流动相，溶解摇匀，过滤，制成1mg/ml的液体，作为对照品溶液；

三、取供检发酵液溶液注入液相色谱仪，和对照品溶液按照本方法的色谱条件进样，按外标法计算供检发酵液中葡萄糖酸的含量，即得维生素 C二步发酵法的发酵液中葡萄糖酸的含量。