[发明专利]生物合成角膜

权利要求书

1.一种生物合成角膜，所述生物合成角膜由酰胺交联的重组人III型胶原蛋白组成，具有8％至18％(w/w)的胶原蛋白含量并且在300nm的光波长处具有≤0.09的光密度，所述生物合成角膜通过包括以下步骤的过程制备：

(a)在0-3℃，将重组人III型胶原蛋白凝胶与NHS在缓冲至pH5.2-5.3的溶液中混合，以获得8-18％(w/w)的最终胶原蛋白浓度，胶原蛋白胺基与NHS的摩尔比选自1:0.3，1:0.4，1:0.5或1:0.6；

(b)在0-3℃向混合物中加入EDC，使得EDC与NHS的摩尔比为1:1，使得交联发生；

(c)在0-3℃进行混合，并且将混合物挤出到具有腔的模具中，所述腔具有适合宿主角膜的尺寸，厚度和曲率；和

(d)在100％湿度在室温温育过夜，以允许所述模具内的交联过程的完成。

2.根据权利要求1所述的生物合成角膜，其中，所述胶原蛋白含量为8％至15％(w/w)。

3.根据权利要求1所述的生物合成角膜，其中，所述重组人III型胶原蛋白以密集有序的小直径微纤维阵列排列。

4.根据权利要求1所述的生物合成角膜，其中，在380-750nm的光波长处所述光密度≤0.05。

5.根据权利要求1所述的生物合成角膜，其中，使用MES以0.150-0.350M的交联最终浓度将所述溶液缓冲至pH 5.2-5.3。

6.根据权利要求5所述的生物合成角膜，其中，MES的所述交联最终浓度为0.157-0.277M。

7.根据权利要求1所述的生物合成角膜，其中，所述最终胶原蛋白浓度为8-15％(w/w)。

8.根据权利要求1所述的生物合成角膜，其中，所述胶原蛋白胺基团与NHS与EDC的摩尔比为1:0.4:0.4。

9.根据权利要求1所述的生物合成角膜，其中，步骤(a)至步骤(c)在0℃发生。

10.根据权利要求1所述的生物合成角膜，所述生物合成角膜通过包括以下步骤的过程制备：

(i)通过在0℃将重组人III型胶原蛋白凝胶与pH5.2，0.625M的MES缓冲液混合；

(ii)分别在pH5.2，0.625M的MES缓冲液中制备7.5％(w/w)的NHS溶液，并且在pH5.2，0.625M的MES缓冲液中制备10％(w/w)的EDC溶液；

(iii)在0℃将等分的NHS溶液与胶原蛋白溶液混合；

(iv)加入EDC溶液；和

(v)将胶原蛋白/NHS/EDC溶液在0℃剧烈混合；

其中，最终混合物的EDC:NHS:胶原蛋白-NH₂摩尔比为0.4:0.4:1。

11.一种生物合成角膜，所述生物合成角膜通过包括以下步骤的过程制备：

(a)在0-3℃将重组人III型胶原蛋白凝胶与NHS在缓冲至pH5.1-5.3的溶液中混合，以得到7-9％(w/w)的最终胶原蛋白浓度，胶原蛋白胺基与NHS的摩尔比为1:0.4；

(b)在0-3℃向混合物中加入EDC，使得EDC与NHS的摩尔比为1:1，使得交联发生；

(c)在0-3℃进行混合，并且将混合物挤出到具有腔的模具中，所述腔具有适合宿主角膜的尺寸，厚度和曲率；以及

(d)在100％湿度在室温温育过夜，以允许所述模具内的交联过程的完成。