[发明专利]一种苦蘵快速培养的方法

说明书

技术领域

本发明涉及组织培养技术领域，特别是涉及一种苦蘵快速培养的方法。

背景技术

苦蘵（PhysalisangulataL），为茄科（Solanaceae）酸浆属（Physalis）植物，古代又称蘵、蘵草、小苦耽等，《尔雅》注：“蘵草，叶似酸浆，花小而白，中心黄，江东以作葅食。”《本草纲目》卷16酸浆条记载：“酸浆、苦蘵，一种二物也，但大者为酸浆，小者为苦蘵，以此为别，败酱亦名苦蘵，与此不同。”苦蘵在中国主要分布于华东、华中、华南及西南，日本、印度、澳大利亚和美洲等亦有分布，常生于海拔500-1500m的山谷林下及村边路旁。苦蘵的宿萼、带宿萼的果实、根及全草均可入药，夏、秋采集，鲜用或干用，具有清热、利尿、解毒之功，用于治疗感冒、肺热咳嗽、咽喉肿痛、龈肿、湿热黄疸、痢疾、水肿、热淋、天疱疮、疔疮等症。从苦蘵中分离得到多种化合物，包括甾体类（主要为酸浆苦味素类和withanolide类）、甾醇类、有机酸、多糖等，具有抗肿瘤、免疫调节、抗炎、抗菌、抗氧化等活性。

苦蘵常规的繁殖方法主要用种子繁殖，每年6月种子成熟后进行采收、阴干，来年3月下旬春播。播种繁殖，种子随采随播，方法简单，管理方便，繁殖系数大，但是由于苦蘵种子很小，不易播种，一般都是与沙土混合均匀播种，但是播种很不均匀，种子繁殖出芽率低、发芽时间长而不整齐、生长缓慢且无法保持母体优良性状。组织培养采用的植物材料完全是在人为提供的培养基和小气候环境条件下进行生长，摆脱了大自然中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影响，且条件均一，对植物生长极为有利，便于稳定地进行周年培养生产。此外，由于植物材料能按几何级数繁殖生产，因此总体来说成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗或脱病毒种苗，利于高度集约化和高密度工厂化生产，也利于 自动化控制生产，是未来农业工厂化育苗的发展方向。

现有技术如授权公告号为CN 104126507 B的中国发明专利，公开了一种大豆组织培养分化苗的生根方法，其所用的生根培养基为：B5、2.0-3.0%蔗糖、3mM MES、50-100mg/L天冬氨酰、100mg/L焦谷氨酸、25-50mg/L叶酸，培养基的pH为5.4-5.6，且B5的用量为1/4标准含量。该生根培养基使得再生植株苗生根的诱导率可以达到100%，但是该生根培养基生根时间较长，且培养基中无抑菌剂成分，不适合苦蘵培养。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高苦蘵发芽率和生根率，能够使苦蘵快速繁殖，缩短苦蘵的繁殖周期，使繁殖后代整齐一致的苦蘵快速培养的方法。

本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：一种苦蘵快速培养的方法，包括种子无菌萌发、诱导愈伤组织及分化、生根培养，具体步骤为：

种子萌发：选用饱满的苦蘵种子，灭菌后用无菌水冲洗干净，然后均匀播种在1/2 MS培养基上，在22-28℃下培养至萌发出苦蘵小苗，该步骤属于无菌萌发，培养基为种子的萌发提供了充足的营养条件，促进种子萌发，缩短萌发时间，能大大提高种子的发芽率和发芽整齐度，使得培养出的苦蘵小苗成功率高；

诱导愈伤组织及分化：取小苗的子叶，切去叶子两端，然后接种在含有1-2mg/L 6-BA和0.5-0.8mg/L NAA的MS培养基上，在22-28℃下培养至得到2-4cm的苦蘵小苗，即可，该步骤中6-BA和NAA的加入能刺激子叶的细胞快速分裂成细胞团，形成愈伤组织，进而长成苦蘵小苗，缩短了诱导愈伤组织及分化的周期，提高了苦蘵组织培养的效率；

生根培养：将小苗剪下，转接到根分化培养液中，在22-28℃下培养至得到主根为3-5条，根长3-5cm的苦蘵苗即可进行炼苗，然后移栽，该根分化培养液能大大提高苦蘵小苗的出根率，使出根整齐、根系细白、愈伤组织化程度轻，而且能有效控制苦蘵小苗褐变，使苦蘵小苗健壮、叶片深绿色，同时该培养液降低生根时间，大大提高了苦蘵组织培养的效率，且能防止烂根现象的发生，使经该根分化培养液培养的苦蘵小苗栽培成活率高、抗病害能力强。