[发明专利]一种狂犬病病毒分型恒温检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明公开一种生物技术领域，涉及一种核酸恒温扩增技术，特别涉及一种狂犬病病毒分型恒温检测试剂盒。

背景技术

狂犬病是一种人兽共患病，多见于犬、猫等肉食动物，人多因被病兽咬伤而感染。狂犬病病毒属于弹状病毒科狂犬病毒属，单股RNA病毒，动物通过互相间的撕咬而传播病毒。狂犬病主要包括7种基因型，分别为：基因1型经典狂犬病病毒Rabies Virus（RABV）；基因2型的Lagos bat virus（LBV）；基因3型的Mokola virus（MOKV）；基因4型的Duvenhage virus（DUVV）；基因5型的European bat lyssavirus 1（EBLV-1）；基因6型的European bat lyssavirus 2（EBLV-2）；基因7型的Australian bat lyssavirus（ABLV）。

狂犬病具有一定的潜伏期，潜伏期长短也会因为每个人的体质而不同，多数在3个月以内，潜伏期的长短与年龄（儿童较短）、伤口部位（头面部咬伤的发病较早）、伤口深浅（伤口深者潜伏期短）、入侵病毒的数量及毒力等因素有关。如何快速有效地检测狂犬病，是目前仍需要解决的一个问题。

目前，国内对狂犬病病毒的检测方法主要有：荧光抗体试(Fluorescent Antibody Test,FAT)、快速狂犬病酶免疫诊断法(Rapid Rabies Enzyme Immunodetection,RREID)、基因芯片检测等。其中，FAT需要荧光显微镜，且荧光阳性和阴性不易辨认。RREID和胶体金免疫层析法简单、快速，但灵敏度不够。基因芯片法，判断准确但是需要特定仪器，耗时较长。

发明内容

本发明的目的是提供一种狂犬病病毒分型恒温检测试剂盒，能够解决现有技术检测耗时、检测结果不易辨认等问题。

为实现上述目的，本发明提供了一种狂犬病病毒分型恒温检测试剂盒，包括RNA提取试剂、PCR反应液、酶系、特异性引物、探针、阳性对照品、阴性对照品，所述检测1型狂犬病病毒的上游引物序列为SEQ ID NO：1，所述检测1型狂犬病病毒的下游引物序列为SEQ ID NO：2；所述检测2-7型狂犬病病毒的上游引物序列为SEQ ID NO：9，所述检测2-7型狂犬病病毒的下游引物序列为SEQ ID NO：10；所述检测1-7型狂犬病病毒的内标上游引物序列为SEQ ID NO：17，所述检测1-7型狂犬病病毒的内标下游引物序列为SEQ ID NO：18；所述检测1型狂犬病病毒的荧光探针序列为SEQ ID NO：19，所述检测2型狂犬病病毒的荧光探针序列为SEQ ID NO：20，所述检测3型狂犬病病毒的荧光探针序列为SEQ ID NO：21，所述检测4型狂犬病病毒的荧光探针序列为SEQ ID NO：22，所述检测5型狂犬病病毒的荧光探针序列为SEQ ID NO：23，所述检测6型狂犬病病毒的荧光探针序列为SEQ ID NO：24，所述检测7型狂犬病病毒的荧光探针序列为SEQ ID NO：25，所述检测1-7型狂犬病病毒的内标荧光探针序列为SEQ ID NO：26。

一种狂犬病病毒分型恒温检测试剂盒，其RNA提取试剂的组分包括：

一种狂犬病病毒分型恒温检测试剂盒，其PCR反应液的组分包括：

优选的，所述Tris-缓冲液可选自Tris-H₂SO4、Tris-乙酸、Tris-HCl中的任意一种或多种，Tris-缓冲液的pH为6.0～9.0。

一种狂犬病病毒分型恒温检测试剂盒，其酶系的组分包括：

一种狂犬病病毒分型恒温检测试剂盒，其1-7型狂犬病病毒探针连接的荧光基团及内标探针连接的荧光基团均可选自FAM、HEX、TEX、VIC、CY5中的任一基团，其1-7型狂犬病病毒探针连接的荧光基团不同于内标探针连接的荧光基团。

一种狂犬病病毒分型恒温检测试剂盒，其恒温扩增的温度为40～45℃。

优选的，一种狂犬病病毒分型恒温检测试剂盒的RNA提取试剂的具体组分如下：

优选的，一种狂犬病病毒分型恒温检测试剂盒的PCR反应液的具体组分如下：

优选的，一种狂犬病病毒分型恒温检测试剂盒的酶系的具体组分如下：

优选的，一种狂犬病病毒分型恒温检测试剂盒，其恒温扩增的温度为40℃。