[发明专利]一种同时测定中药十八反之苦参反藜芦生物碱含量的方法

说明书

本发明公开了一种同时测定中药十八反之苦参反藜芦生物碱含量的方法，该方法利用高效液相色谱法，以C₁₈色谱柱，流动相A：甲醇；流动相B：乙腈；流动相C：体积分数为0.1％的三乙胺水溶液(磷酸调pH值至3.0)，梯度洗脱程序为：0→10min：2％‑4％B，95％‑88％C；10→20min：4％‑30％B，88％‑60％C；20→30min：30％‑10％B，60％‑50％C，能够同时测定藜芦与苦参配伍后藜芦胺、介芬胺、苦参碱、氧化苦参碱的含量，该方法快速、准确，为开发临床安全有效的藜芦与苦参配伍药物提供了可靠的检测方法。

技术领域

本发明属于中药中生物碱检测技术领域，具体涉及一种同时测定中药十八反之苦参反藜芦生物碱含量的方法。

背景技术

中药配伍是中医用药的重要形式，中药配伍禁忌是中药配伍的重要组成部分。配伍禁忌，是指某些药物合用会产生剧烈的毒副作用或降低和破坏药效。中药“十八反”是中药配伍禁忌的核心内容。藜芦与苦参是中药十八反中的药对，苦参为豆科槐属植物，其化学成分主要为生物碱，具有抗溃疡、降血脂、抗生育、抗心律失常，抗乙肝及抗肿瘤的作用。藜芦为百合科藜芦属植物，主要含有生物碱类成分，藜芦生物碱在抗肿瘤、降血压等方面具有良好的效果。传统中医药理论认为藜芦与苦参存在配伍禁忌，藜芦与苦参合用毒性加大，且由于藜芦治疗用量和中毒剂量非常接近，从而限制了二者在临床上的应用。因此建立检测藜芦与苦参配伍中有毒成分生物碱的含量测定方法，对于藜芦苦参配伍在临床上的进一步应用具有重要意义。目前关于藜芦、苦参化学成分含量测定的研究多为单味药化学成分的含量测定，对于二者配伍后化学成分含量测定的方法研究目前尚未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种采用高效液相色谱法同时快速、准确测定藜芦与苦参配伍后藜芦胺、介芬胺、苦参碱、氧化苦参碱含量的方法。

解决上述技术问题所采用的技术方案是：

1、制备对照品溶液。

2、利用高效液相色谱对步骤1中的对照品溶液进行分析，色谱条件：C₁₈色谱柱，流动相A：甲醇；流动相B：乙腈；流动相C：体积分数为0.1％的三乙胺水溶液，并且其用磷酸调pH值至3.0；梯度洗脱程序为：0→10min：2％-4％B，95％-88％C；10→20min：4％-30％B，88％-60％C；20→30min：30％-10％B，60％-50％C；以峰面积值为纵坐标、对照品含量为横坐标，绘制各对照品的峰面积值随含量变化的标准曲线。

3、制备供试品溶液。

4、采用步骤2的方法对供试品溶液进行分析，结合标准曲线即可确定供试品溶液中藜芦胺、介芬胺、苦参碱、氧化苦参碱的含量。

上述测定方法中，优选C₁₈色谱柱为岛津ODS-C₁₈色谱柱、检测柱温为30～40℃、检测波长为215～230nm、流动相流速为1.0mL/min。

本发明以甲醇-乙腈-0.1％三乙胺水溶液(磷酸调pH值至3.0)为流动相，由于目标检测物苦参碱、氧化苦参碱、介芬胺和藜芦胺的水溶液呈碱性，易与流动相发生酸碱中和反应生成盐，因此能够实现目标检测物的有效分离，且三乙胺能防止拖尾改善峰形。

本发明方法能够快速、准确测定藜芦与苦参配伍后藜芦胺、介芬胺、苦参碱、氧化苦参碱的含量，为开发临床安全有效的藜芦与苦参配伍药物提供了可靠的检测方法。

附图说明

图1是苦参碱(1)、氧化苦参碱(2)、介芬胺(3)、藜芦胺(4)对照品溶液(进样量为5μL)的色谱图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明进一步详细说明，但本发明的保护范围不仅限于这些实施例。

实施例1