[发明专利]利用地中海拟无枝酸菌发酵生产利福霉素的培养基和培养方法

权利要求书

1.一种利用地中海拟无枝酸菌发酵生产利福霉素的培养基，其特征在于包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其中

所述一级种子培养基组成为：转化糖蜜13～17g/L、蝇蛆干粉12～16g/L、菌体蛋白9～13g/L、酵母自溶粉FM901 8～12g/L、轻质碳酸钙1～5g/L、硫酸铵0.5～0.9g/L；

所述二级种子培养基组成为：转化糖蜜16～20g/L、蝇蛆干粉14～18g/L、菌体蛋白11～15g/L、酵母自溶粉FM901 5～9g/L、微生物复合氮素 FT100 8～12g/L、轻质碳酸钙1～5g/L、硫酸铵0.5～0.9g/L；

所述发酵培养基组成为：甘油13～17ml/L、转化糖蜜22～26g/L、蝇蛆干粉17～21g/L、菌体蛋白13～17g/L、酵母自溶粉FM901 7～11g/L、微生物复合氮素 FT100 11～15g/L、轻质碳酸钙1～5g/L、硫酸铵0.5～0.9g/L、氧化铝0.03～0.07g/L、磷酸镁0.01～0.05g/L、氯化钴0.004～0.008g/L、磷酸二氢钾0.02～0.06g/L、硫酸锰0.002～0.006g/L。

2.一种利用权利要求1所述培养基发酵生产利福霉素的培养方法，其特征在于工艺步骤为：

1） 一级种子培养：首先将种子培养基灭菌并冷却至20～25℃，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的地中海拟无枝酸菌母瓶发酵液接入一级种子培养基中进行一级种子培养，至菌体浓度40～45%、培养时间65～70h移种；

2）二级种子培养：首先将二级种子培养基灭菌并冷却至20～25℃，并用无菌空气保压，将已经培养好的一级种子培养液移入二级种子培养基中进行二级种子培养，至菌体浓度35～39%、培养时间40～45h时移种；

3） 发酵培养：先将发酵培养基灭菌，冷却至20～25℃，并用无菌空气保压，然后将培养好的二级种子培养液移入发酵培养基进行发酵培养，至菌体浓度34～38%、发酵周期不超过190h，化学效价＞30000u/ml时终止发酵。

3.按照权利要求2所述的培养方法，其特征在于所述培养好的地中海拟无枝酸菌母瓶发酵液质量要求为菌体浓度20～30%；镜检无杂菌，移种量为0.5-0.6L/m³。

4.按照权利要求2所述的培养方法，其特征在于所述一级种子培养条件为：罐压0.03～0.06MPa；罐温28～39℃；空气流量：40～60m³/h；搅拌转速50～60r/min；

所述二级级种子培养条件为：罐压0.03～0.06MPa；罐温28～29℃；空气流量：120～150m³/h；搅拌转速70～80r/min。

5.按照权利要求2所述的培养方法，其特征在于所述发酵培养条件为：

a 培养基初始pH：发酵培养基灭菌后pH控制在6.6～7.0；

b 温度：培养温度28～29℃，

c 搅拌转速：转速控制在90～100r/min，

d 压力控制：罐压0.05～0.06MPa，

e pH控制：发酵过程中pH控制在6～7，

f 溶氧控制：发酵过程中，溶氧含量控制在25%以上。

6.按照权利要求2所述的培养方法，其特征在于所述发酵培养过程中采用流加法进行补料，包括补糖和补氮，其中

所述补糖是指补入转化糖蜜，当发酵液中溶氧超过60%，匀速补入转化糖蜜，补入速率为12-13L/(M³·h)，当溶氧达到25%后停止补料；

所述补氮是指补入质量浓度为50～60%的微生物复合氮素 FT100，当发酵液pH超过6.8，匀速补入微生物复合氮素 FT100，补入速率为8-9L/(M³·h)，当pH为6.2时，停止补料。