[发明专利]一种浒苔芽孢杆菌Y15-8及其抗肿瘤活性蛋白

说明书

一种浒苔芽孢杆菌Y15‑8及其抗肿瘤活性蛋白，属于海洋生物资源和生物医药技术领域，所述浒苔芽孢杆菌Y15‑8于2016年12月12日保藏于中国武汉典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2016744。该菌株与浒苔共附生，其产生的代谢产物活性蛋白对多种肿瘤细胞具有细胞毒性，具有较好的研究价值和应用前景。

技术领域

本发明属于海洋生物资源和生物医药技术领域，具体地涉及一种浒苔芽孢杆菌Y15-8及其抗肿瘤活性蛋白。

背景技术

当今社会，恶性肿瘤一直严重威胁着人类生命和健康，是中国乃至全人类社会的第一大杀手。现如今，临床上治疗恶性肿瘤的手段多是采用综合疗法，以手术切除、放疗、化疗和免疫治疗相结合。在癌症化疗领域，许多微生物来源的天然产物虽具有较强的药效，但其分子量大，水溶性较低，毒性较强，副作用大等因素导致许多天然产物无法继续应用，因此，寻找有效的抗肿瘤药物与方法仍是全球的研究热点。

海洋微生物作为抗肿瘤活性物质的新来源，已经受到了全世界海洋研究工作者的关注。随着研究的深入，海洋微生物来源的天然抗肿瘤药物研究取得了较多成果，具有良好的发展优势:①微生物发酵产生的较多次级代谢产物化学结构独特且复杂，难以人为合成，为新药开发利用提供了唯一且宝贵的来源；②许多微生物代谢产物化合物分子量小，水溶性强，毒性弱，可直接作为药物使用，不仅具有潜在的治疗活性，且具有临床发展需要的药物代谢动力学属性；③微生物具有生长周期短、代谢过程易控制、菌种易选育的特点，可通过大规模发酵培养而实现工业化生产。

浒苔作为一种重要的海洋资源，含有丰富的碳水化合物、氨基酸、微量元素、维生素、脂肪酸等营养物质，具有降血糖、抗菌消炎、抗肿瘤活性、提高免疫力的作用。我国浒苔资源十分丰富，仅青岛沿海2016年的爆发量就在50万t以上，目前来看对浒苔的研究已比较成熟，但是多数未实现规模化利用，整体利用率不高，造成浒苔资源的大量浪费。同时浒苔中还含有一些共附微生物，但这些微生物及其代谢产物迄今为止还没有被充分挖掘和利用。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供一种浒苔芽孢杆菌Y15-8及其抗肿瘤活性蛋白，克服现有技术的不足，提高海洋资源的利用率。

一种浒苔芽孢杆菌Y15-8(Bacillus sp.Y15-8)，该浒苔芽孢杆菌Y15-8于2016年12月12日保藏于中国武汉典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2016744。

本发明还提供一种所述浒苔芽孢杆菌Y15-8发酵产生的浒苔芽孢杆菌蛋白,所述蛋白具有抗肿瘤活性；所述浒苔芽孢杆菌Y15-8的发酵培养条件为：发酵液中各成分的终浓度为牛肉膏2～6g/L、蛋白胨7～12g/L、氯化钠2～6g/L，pH6.0～9.0，在1.05kg/cm²，115～121℃，15～35min的条件下灭菌，在150～250r/min，25～37℃的条件下在恒温震荡摇床中培养48～80h。

本发明还提供一种浒苔芽孢杆菌Y15-8抗肿瘤活性蛋白的制备方法，步骤如下：

(1)发酵培养

将浒苔芽孢杆菌Y15-8发酵，发酵条件：发酵液中各成分的终浓度为牛肉膏2～6g/L、蛋白胨7～12g/L、氯化钠2～6g/L、pH6.0～9.0，在1.05kg/cm²，115～121℃，15～35min的条件下灭菌，在150～250r/min、25～37℃的条件下在恒温震荡摇床中培养48～80h；

(2)超滤截留

将浒苔芽孢杆菌Y15-8发酵培养所得到的发酵液，在8000～10000rpm，10～25min条件下离心，收集上清液，用分子量为3kDa和50kDa的超滤膜超滤，获得分子量3～50kDa之间的组分；

(3)硫酸铵沉淀