[发明专利]用于鉴定结球甘蓝开花早晚的分子标记、引物对及分子标记方法与应用

说明书

本发明属于分子生物学领域，具体涉及用于鉴定结球甘蓝开花早晚的分子标记、引物对及分子标记方法与应用，所述分子标记、引物对能够用于结球甘蓝耐抽薹晚开花育种材料、品种的快速鉴定和耐抽薹晚开花材料转育的分子辅助选择，在甘蓝类蔬菜育种实践及耐抽薹理论研究上均具有重要意义。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及用于鉴定结球甘蓝开花早晚的分子标记、引物对及分子标记方法与应用。

背景技术

结球甘蓝(Brassica oleracea var.capitata)，以下简称甘蓝，是十字花科芸薹属的二年生蔬菜作物，为绿体春化型植物，第一年生长到一定大小形成叶球，完成营养生长，经过冬季春化过程，第二年春、夏开花结实，完成生殖生长。结球甘蓝的食用器官主要是叶球，但在结球甘蓝的生产中，由于甘蓝品种耐抽薹性差、加上春季经常出现倒春寒现象等，结球甘蓝在叶球成熟前感受低温春化而出现未熟抽薹现象，一旦出现抽薹，就会阻止叶球的生长而直接抽薹开花，进入生殖生长阶段，给生产上带来巨大的经济损失。因此，选育低温春化不敏感的甘蓝品种是解决该问题的重要途径，而实现该育种目标的前提是选育耐抽薹的晚开花甘蓝亲本材料。

目前育种材料的筛选方法主要有两种，一种是传统的育种方法，该方法需要跨年度进行耐抽薹性状的选择鉴定，周期长，操作程序繁琐，工作量大，且由于耐抽薹晚开花性状除了受遗传因素影响外，还和环境因素密切相关，因此依靠表型鉴定存在较大的不准确性；另一种方法是近年来发展起来的分子标记辅助方法，将分子标记技术与传统育种学相结合，用稳定、可靠的DNA分子标记代替易受环境影响的表型标记，对育种材料进行筛选。因此，开发一种能够鉴别结球甘蓝开花早晚的分子标记，对苗期筛选晚开花的育种材料，提高育种效率具有重要意义。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种用于鉴定结球甘蓝开花早晚的分子标记，所述分子标记能够用于结球甘蓝耐抽薹晚开花育种材料、品种的快速鉴定和耐抽薹晚开花材料转育的分子辅助选择。

本发明的第二个目的在于提供上述分子标记的引物对。

本发明的第三个目的在于提供上述分子标记的获得方法。

本发明的第四个目的在于提供上述分子标记及其引物对的应用。

为实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种用于鉴定结球甘蓝开花早晚的InDel分子标记，命名为InDel-FLC2，其核苷酸序列如Seq ID No.1所示。

根据本发明的分子标记，晚开花结球甘蓝的BoFLC2基因缺失所述分子标记，早开花结球甘蓝的BoFLC2基因含有所述分子标记；具体地，晚开花结球甘蓝的BoFLC2基因编码区序列缺失所述分子标记，早开花结球甘蓝的BoFLC2基因编码区序列含有所述分子标记；进一步具体地，晚开花结球甘蓝的BoFLC2基因编码区序列第一个内含子区域缺失所述分子标记，早开花结球甘蓝的BoFLC2基因编码区序列第一个内含子区域含有所述分子标记。

第二方面，本发明提供扩增上述用于鉴定结球甘蓝开花早晚的分子标记的引物对，上游引物序列如SEQ ID NO.2所示，下游引物序列如SEQ ID NO.3所示。

第三方面，本发明提供上述用于鉴定结球甘蓝开花早晚的分子标记的获得方法，包括以下步骤：

步骤(1)：锚定早开花和晚开花结球甘蓝的BoFLC2基因的差异区段；

步骤(2)：测序获得早开花和晚开花结球甘蓝的BoFLC2基因核苷酸序列，结合步骤(1)锚定的差异区段，比较获得差异区段的核苷酸序列信息；

步骤(3)：根据差异区段核苷酸序列信息，设计引物对，对结球甘蓝进行基因型分析；

步骤(4)：结合早开花、晚开花结球甘蓝的开花期表型数据和其基因型，获得分子标记。