[发明专利]一种连续超薄切片的制备和自动收集方法

说明书

本发明公开了一种连续超薄切片的制备和自动收集方法，包括以下步骤：通过切片机进行连续超薄切片的制备；根据切片机的切片速度，对超薄切片收集器的收集速度进行调整；通过超薄切片收集器对切片机制备的连续超薄切片进行自动收集；在对超薄切片收集器的收集速度进行调整过程中，通过对超薄切片收集器上的收集带、以及在收集带上的超薄切片进行实时图像采集，来对超薄切片和所述收集带上孔洞的位置进行分析，进而手动或自动调整所述切片机的切片速度，以及在收集全过程实时自动调节所述超薄切片收集器的收集速度。本方法能够大大拓展连续超薄切片收集和图像采集方法的适用性和多样性，非常适合于在电子显微成像或光学显微成像实验室进行推广应用。

技术领域

本发明涉及实验装置领域，特别涉及一种连续超薄切片的制备和自动收集方法。

背景技术

传统的连续超薄切片电子显微成像技术必须依赖熟练的专业技术员以手动方法通过单孔铜网来收集成百上千张的连续切片。由于在收集过程中易出现丢片、切片次序错乱、因切片停顿造成信息丢失等问题，加之收集速度慢和实验周期长的缺点，故限制了连续切片在较大尺度生物样品三维重构中的应用。近些年，国际上对该项技术的改进已有了重大突破。

其中，由哈佛大学Jeff Lichtman等人研发的自动化带式收集切片的超薄切片机(Automatic Tape-Collecting Ultramicrotome,ATUM)的基本原理是用普通钻石刀对树脂包埋的样品进行连续切片后，用连续转动的带子进行收集，然后将收集好的切片带粘贴到硅片上，转移至扫描电镜中通过背散射电子成像，获取系列图像。这种连续切片自动收集的方法可实现大面积(毫米级)生物样品切割，样品便于长期保存、反复成像，从而使珍贵的样品可以像图书馆里的图书一样反复“查阅”。科研人员可对感兴趣的区域进行分次成像研究，可实现多台设备的并行成像，从而提高图像采集效率和灵活度，大大缩短实验周期。

但是该方法收集的连续切片只能用于扫描电镜获取二维的图像，而扫描电镜较之透射电镜成像速度较慢，分辨率较低。因此，不能满足在透射电镜上获取高分辨率图像的需求，采集大尺度的图像实验周期也较长。

发明内容

针对上述现有技术存在的不足之处，本发明提供了一种连续超薄切片的制备和自动收集方法。

为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案为：

一种连续超薄切片的制备和自动收集方法，包括以下步骤：

通过切片机进行连续超薄切片的制备；

根据所述切片机的切片速度，对超薄切片收集器的收集速度进行调整；

通过所述超薄切片收集器对所述切片机制备的所述连续超薄切片进行自动收集；

在对所述连续超薄切片收集器的收集速度进行调整过程中，通过对所述超薄切片收集器上的收集带、以及在所述收集带上的所述超薄切片进行实时图像采集，来对所述超薄切片和所述收集带上孔洞的位置进行分析，进而手动或自动调整所述切片机的切片速度，以及在收集全过程实时自动调节所述超薄切片收集器的收集速度，使每张所述超薄切片均能覆盖在所述收集带的孔洞中心上。

进一步的，在所述超薄切片收集器对所述切片机制备的连续所述连续超薄切片进行自动收集前，通过对所述超薄切片收集器进行位置调整，使所述超薄切片收集器上的带有所述收集带的切片导引机构伸入到所述切片机的切片刀水槽内，进而使在所述切片刀水槽内的所述超薄切片通过所述切片导引机构运送到所述收集带上。

进一步的，调节所述切片导引机构在所述切片刀水槽中的位置调整，使在所述切片刀水槽内的所有所述超薄切片与所述收集带上的孔洞在同一直线上。