[发明专利]一种噬菌体电化学发光信号扩增探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种噬菌体电化学发光信号扩增探针，其特征在于：包括M13噬菌体、融合表达在M13噬菌体中的链霉亲和素，以及共价连接在M13噬菌体上的三联吡啶钌。

2.权利要求1所述的噬菌体电化学发光信号扩增探针的制备方法，包括以下步骤：

1)制备三联吡啶钌-N-羟基琥珀酰亚胺酯；

2)将链霉亲和素融合表达在M13噬菌体上，制得链霉亲和素-M13噬菌体；

3)将三联吡啶钌-N-羟基琥珀酰亚胺酯共价连接到链霉亲和素-M13噬菌体上，得到本发明所述的噬菌体电化学发光信号扩增探针。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)具体包括：以顺-二氯二(2,2'-联吡啶)钌(II)和2,2'-联吡啶-4,4'-二羧酸为原料，在甲醇/水混合溶剂中进行反应，得到羧基化三联吡啶钌；随后加入六氟磷酸钠，得到三联吡啶钌六氟磷酸盐；然后加入N-羟基琥珀酰亚胺和N,N’-二环己基碳二亚胺，以N,N’-二甲基甲酰胺为溶剂进行反应，得到三联吡啶钌-N-羟基琥珀酰亚胺酯。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)具体包括：将链霉亲和素的基因片段克隆到噬菌粒载体上，然后转化至大肠杆菌进行培养，取阳性克隆质粒，加入辅助噬菌体进行培养，培养结束后进行离心，得到链霉亲和素-噬菌体；所述噬菌粒载体为噬菌粒载体pC、噬菌粒载体p12或噬菌粒载体p87；所述辅助噬菌体为辅助噬菌体M13KO7。

5.根据权利要求2或4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中，将链霉亲和素融合表达在M13噬菌体的P3蛋白上，每个M13噬菌体上表达1～5个链霉亲和素分子。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)具体包括：将步骤2)得到的链霉亲和素-M13噬菌体加入PEG/NaCl混合溶液中培育，离心，得到的噬菌体小球重悬在碳酸氢钠缓冲液中，然后加入步骤1)得到的三联吡啶钌-N-羟基琥珀酰亚胺酯进行反应，经纯化后，得到链霉亲和素-M13噬菌体-钌信号扩增探针。

7.根据权利要求2或6所述的制备方法，其特征在于：所述步骤3)中，将三联吡啶钌-N-羟基琥珀酰亚胺酯共价连接到M13噬菌体的P8蛋白的赖氨酸氨基上。

8.一种核酸-噬菌体电化学发光信号探针，由权利要求1所述的噬菌体电化学发光信号扩增探针与生物素标记的DNA或RNA探针构成。

9.一种抗体-噬菌体电化学发光信号探针，由权利要求1所述的噬菌体电化学发光信号扩增探针与生物素标记的抗体探针构成。