[发明专利]一种检测复发性流产易感基因的检测试剂盒

权利要求书

1.一种检测复发性流产易感基因的检测试剂盒，其组成成分为：检测TNF-α基因上单核苷酸多态性位点G308A(rs1800629)，CTLA4基因上单核苷酸多态性位点A49G(rs231775)，MTHFR基因上单核苷酸多态性位点C677T(rs1801133)、A1298C(rs1801131)的PCR特异引物与DNA测序引物、Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、SAP酶、ExoI酶、BigDyemix、EDTA溶液、70％乙醇溶液、100％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特点在于：所述的特异性引物对是指针对TNF-α基因上单核苷酸多态性位点G308A(rs1800629)，CTLA4基因上单核苷酸多态性位点A49G(rs231775)，MTHFR基因上单核苷酸多态性位点C677T(rs1801133)、A1298C(rs1801131)，能特异性扩增出包含4个SNPs位点的DNA片段的引物对。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特点在于：所述的DNA测序引物是针对TNF-α基因上单核苷酸多态性位点G308A(rs1800629)，CTLA4基因上单核苷酸多态性位点A49G(rs231775)，MTHFR基因上单核苷酸多态性位点C677T(rs1801133)、A1298C(rs1801131)，能通过DNA测序技术特异性检测出上述4个SNPs位点基因型的DNA测序引物。

4.根据权利要求1所示的试剂盒，其所含的4对特异性引物序列如下：

(1)TNF-α(G308A)正向引物：5′GAGGCAATAGGTTTTGAGGGGCATG 3′

TNF-α(G308A)反向引物：3′GGACGGGGTTCAGCCTCCAGGGTCC 5′

(2)CTLA4(A49G)正向引物：5′CAGCGGCACAAGGCTCAGCTGAACCTGGCT 3′

CTLA4(A49G)反向引物：3′CCAGGACCTGGCCCTGCACTCTCCTGTTTT 5′

(3)MTHFR(C677T)正向引物：5′TTGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGAG 3′

MTHFR(C677T)反向引物：3′CGATTTCATCATCACGCAGCTTTTC 5′

(4)MTHFR(A1298C)正向引物：5′TGGGGGGAGGAGCTGACCAGTGAAG 3′

MTHFR(A1298C)反向引物：5′AAGTGTCTTTGAAGTCTTTGTTCTT 3′。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所含的4条DNA测序引物序列如下：

(1)TNF-α(G308A)测序引物：5′GAGGCAATAGGTTTTGAG 3′

(2)CTLA4(A49G)测序引物：5′CAGCGGCACAAGGCTCAGCTG 3′

(3)MTHFR(C677T)测序引物：5′TTGAAGGAGAAGGTGTCTG 3′

(4)MTHFR(A1298C)测序引物：5′TGGGGGGAGGAGCTGACCAG 3′。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于试剂盒的组分和含量包括：

(1)PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液2.5ul，25mMdNTP混合液0.2ul，5U/ulTaqDNA聚合酶0.125ul，20uM特异性引物对，每条引物各0.25ul，ddH2O 19.175ul。

(2)PCR产物纯化体系：1U/ulSAP酶0.75ul，10U/ulExoI酶0.375ul，ddH2O3.875ul。

(3)测序反应体系：25％BigDyemix1ul，3.2uMDNA测序引物1ul，125mMEDTA溶液1ul，100％乙醇溶液15ul，70％乙醇溶液30ul，HIDI溶液8ul，ddH2O2ul。

本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。