[发明专利]一种检测雌激素敏感性易感基因的检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种雌激素敏感性易感基因检测试剂盒，根据检测结果从基因水平评估雌激素敏感性的级别，并作为预防和治疗更年期综合征的方向指导。

背景技术

女性更年期综合征是女性卵巢功能逐渐衰退至完全消失的过渡时期，女性更年期综合征多发生于40-60岁多间，由于生理和心理改变而出现的一系列临床症状，常见有烘热汗出、烦躁易怒、心悸失眠或忧郁健忘等。

在生育期卵巢周期性产生雌激素和孕激素，雌孕激素协同作用，维持女性健康生理。女性40岁后，卵巢功能逐渐衰退，直至绝经。雌激素水平明显下降导致妇女身心功能异常，产生潮热、出汗等一系列症状，统称更年期综合征。对存在雌激素缺乏的绝经后妇女补充雌激素及孕激素以缓解其更年期症状的治疗为雌激素替代治疗。在治疗过程中，有的女性对雌激素敏感，运用雌激素替代疗法治疗更年期综合征过程中容易雌激素补充过量。而长期的雌激素过量会诱发乳腺癌。因此检测雌激素敏感性意义重大。

最近的研究表明，雌激素敏感性的发生与ER-α、CYP17基因密切相关。ER-α基因编码雌激素受体，与雌激素结合，可导致正常乳腺上皮细胞增生，而增生细胞比静止期细胞对致癌物更敏感，提示雌激素是一种肿瘤促进剂，它能刺激乳腺癌细胞在体内生长增殖。研究表明，约60-70％的乳腺癌是雌激素依赖性肿瘤。ER-α基因c.453-397T＞C、c.453-351A＞G基因突变，ER-α水平上调，促进转化生长因子α(TGFα)表达，对雌激素敏感，从而促进乳腺癌发生。

CYP17基因编码细胞色素P45017A1，同时具有17α-羟化酶、17，20-裂解酶的活性，在类固醇性激素合成的途径中起关键作用。在17α-羟化酶活性和17，20侧链裂解酶活性都不存在的情况下，孕烯醇酮向合成盐皮质激素方向转化；如果只有17α-羟化酶活性发挥作用，孕烯醇酮向糖皮质激素方向转化；当17α-羟化酶和17，20侧链裂解酶同时具有活性时，孕烯醇酮可向性激素方向转化。CYP17基因c.-34T＞C突变，导致17α-羟化酶和17，20-裂解酶活性增强，提高雌激素和性激素的合成水平，过度刺激靶器官，增加乳腺癌的发病风险。

综上所述，鉴于ER-α、CYP17基因与雌激素敏感性有着重要的关联关系，可以做为预测和筛查雌激素敏感人群的潜在指征，通过这些雌激素敏感性易感基因的检测，能在预防因雌激素敏感导致雌激素替代疗法诱发乳腺癌方面起到不容忽视的重要作用，为更年期女性使用雌激素替代疗法提供个体化治疗辅助依据。

发明内容

本发明基于ER-α基因上单核苷酸多态性位点c.453-397T＞C(rs2234693)、c.453-351A＞G(rs9340799)，CYP17基因上单核苷酸多态性位点c.-34T＞C(rs743572)基因型可作为评估雌激素敏感的危险因子的基础上，研制一种雌激素敏感性易感基因检测试剂盒。

该试剂盒包括：

检测ER-α基因上单核苷酸多态性位点c.453-397T＞C(rs2234693)、c.453-351A＞G(rs9340799)，CYP17基因上单核苷酸多态性位点c.-34T＞C(rs743572)的3个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物；

PCR反应组件(包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等)；

PCR产物纯化组件(包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等)；

DNA测序反应组件(包括BigDyemix，EDTA溶液、100％乙醇溶液、70％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等)。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液2.5ul；25mMdNTP混合液0.2ul；5U/ulTaqDNA聚合酶0.125ul；20uM特异性引物对(每条引物各0.25ul)；ddH2O19.175ul。

PCR产物纯化体系：1U/ulSAP酶0.75ul；10U/ulExoI酶0.375ul；ddH2O3.875ul。

测序反应体系：25％BigDyemix1ul；3.2uMDNA测序引物1ul；125mMEDTA溶液1ul；100％乙醇溶液15ul；70％乙醇溶液30ul；HIDI溶液8ul；ddH2O2ul。

本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。

具体实施方式