[发明专利]一种碱性果胶酶的高效率固定化方法

权利要求书

1.一种碱性果胶酶的高效率固定化方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以环己烷为溶剂，加入无水乙醇、冰醋酸搅拌混合均匀后转移至带有冷凝管的三口烧瓶中，往三口烧瓶中缓慢滴加正硅酸乙酯，滴加完毕后缓慢升温至60-70℃，继续往三口烧瓶中滴加三乙胺，滴加完毕后，升温至100-120℃，回流反应8-13h，反应结束后将反应产物在70℃下浓缩处理10min，得到的浓缩物和去离子水混合，滴加硅烷偶联剂，500W功率下超声处理1-4h，得到分散液；其中，环己烷、无水乙醇、冰醋酸、正硅酸乙酯、三乙胺的体积比为50:8:8：(0.8-1.5)：1；浓缩物、硅烷偶联剂和去离子水的质量比为1：(0.03-0.06)：(4-8)；

(2)将丙烯酰胺、N，N-二甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酸和去离子水以质量比为3:1：(0.5-1)：10的比例混合搅拌得到单体水溶液；将制得的单体水溶液滴加到步骤(1)制得的分散液中，搅拌混合均匀，加入引发剂，混合均匀后升温至60-70℃，反应1-3h，反应结束后冷却至室温，过滤，固体洗涤干净用盐酸浸泡处理，处理结束后过滤，过滤得到的沉淀用去离子水洗涤，真空干燥，得到高分子包覆的纳米氧化硅微球；

(3)将上述制得的高分子包覆的纳米氧化硅微球和戊二醛溶液混合，300W功率下超声处理3-5h，处理结束后，过滤，沉淀用去离子水洗涤，真空干燥，得到活化的高分子包覆的纳米氧化硅微球；

(4)配制质量浓度为1.5-3.5％碱性果胶酶溶液，并和缓冲溶液混合后加入活化的高分子包覆的纳米氧化硅微球，500r/min转速下搅拌固定1-5h，然后过滤，沉淀用去离子水洗涤感觉后，真空冷冻干燥，得到固定化碱性果胶酶。

2.如权利要求1所述的一种碱性果胶酶的高效率固定化方法，其特征在于，步骤(2)中，所述单体水溶液的滴加速度为3-5mL/min、其与分散液的质量比为8：(1-4)。

3.如权利要求1所述的一种碱性果胶酶的高效率固定化方法，其特征在于，步骤(2)中，丙烯酰胺、引发剂的质量比为7：(0.6-1)。

4.如权利要求1所述的一种碱性果胶酶的高效率固定化方法，其特征在于，步骤(3)中，所述戊二醛溶液的质量浓度为1-5％。

5.如权利要求1所述的一种碱性果胶酶的高效率固定化方法，其特征在于，步骤(3)中，所述高分子包覆的纳米氧化硅微球、戊二醛溶液的质量比为1：(13-17)。

6.如权利要求1所述的一种碱性果胶酶的高效率固定化方法，其特征在于，步骤(4)中，所述缓冲溶液为柠檬酸钠和柠檬酸的混合水溶液，缓冲溶液的质量浓度为5-8％。

7.如权利要求1所述的一种碱性果胶酶的高效率固定化方法，其特征在于，步骤(4)中，碱性果胶酶溶液、高分子包覆的纳米氧化硅微球的质量比为(2-6)：1。