[发明专利]肺癌临床用药突变基因检测试剂盒

权利要求书

1.一种肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，其特征在于，包括：肺癌临床用药突变基因捕获探针，所述捕获探针通过叠瓦式设计获得，覆盖待检测基因的外显子区域和内含子区域，且探针密度能够确保每条待检测区域的DNA模板都有对应探针与之结合。

2.根据权利要求1所述的肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，其特征在于，所述肺癌临床用药突变基因检测试剂盒用于检测ROS1-SLC34A2融合断裂点，所述捕获探针覆盖区域如表1所示：

表1

3.根据权利要求2所述的肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，其特征在于，所述捕获探针的序列包括SLC34A2探针序列和ROS1探针序列，其中，所述SLC34A2探针序列具体包括SEQ ID NO:103至SEQ ID NO:212的110条探针，所述ROS1探针序列具体包括SEQ ID NO:213至SEQ ID NO:227的329条探针。

4.根据权利要求1所述的肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，其特征在于，所述捕获探针为探针混合物，所述探针混合物的浓度为20～30ng/μl，优选为25ng/μl。

5.根据权利要求1所述的肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，其特征在于，所述肺癌临床用药突变基因检测试剂盒还包括文库构建相关试剂，所述文库构建相关试剂包括2×HiFi热启动酶缓冲液，所述2×HiFi热启动酶缓冲液包括：850～950mM Tris-HCl、3.5～5.5mM MgCl₂、0.04U/μl高保真热启动酶和0.5～0.7mM双脱氧核糖核酸。

6.根据权利要求5所述的肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，其特征在于，所述2×HiFi热启动酶缓冲液包括：900mM Tris-HCl、5mM MgCl₂、0.04U/μl高保真热启动酶和0.6mM双脱氧核糖核酸。

7.根据权利要求5所述的肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，其特征在于，所述文库构建相关试剂还包括：末端修复加A反应体系、接头连接体系以及文库富集引物；

优选地，所述末端修复加A反应体系包括末端修复加A反应缓冲液以及末端修复加A酶，更优选地，所述末端修复加A反应缓冲液包括400～600mM Tris～HCl、80～120mM MgCl2、80～120mM DTT、8～10nM ATP、3～5mM dATP、3～5mM dCTP、3～5mM dGTP、3～5mM dTTP；所述末端修复加A酶的浓度为0.04～0.06U/μl；

优选地，所述接头连接体系包括双链寡核苷酸接头、DNA连接酶以及DNA连接酶缓冲液；更优选地，所述双链寡核苷酸接头包括48对，所述DNA连接酶的浓度为0.04～0.06U/μl；所述DNA连接酶缓冲液包括800～900mM的Tris～HCl、40～60mM的MgCl₂、40～60mM的DTT及0.5～1.5mM的ATP；

优选地，所述文库富集引物的浓度为3～6μM，进一步优选为5μM。

8.根据权利要求5所述的肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，其特征在于，所述肺癌临床用药突变基因检测试剂盒还包括：肺癌临床用药突变基因捕获试剂，所述肺癌临床用药突变基因捕获试剂包括：杂交通用引物和杂交index引物；

优选地，所述杂交通用引物的浓度为225～275μM，更优选为250μM；

优选地，所述杂交index引物1-48的浓度为22.5～27.5μM，更优选为25μM；

优选地，所述杂交index引物为48个。