[发明专利]一种快速检测体液中肿瘤细胞的试剂盒及其检测方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及临床肿瘤细胞鉴定领域，尤其是一种快速检测体液中肿瘤细胞的试剂盒细胞的试剂盒及检测方法和应用。

背景技术

纳米磁珠是一种具有磁性的功能材料，其主要原料为铁氧体。一方面，各项肿瘤研究中对于纳米磁珠的使用多是在纳米磁珠表面连接功能基团——如氨基、羧基、巯基等，进行抗体的共价或者非共价偶联，制备成免疫磁珠，然后结合相应的抗原或抗体，再利用铁氧体能够被磁铁吸附的特性，外加磁场吸引肿瘤细胞定向移动，从而达到分离，检测，纯化基因、蛋白质、细胞、微生物等的目的。

以膀胱癌为例，膀胱癌是泌尿系统中发病率第二的恶性肿瘤，仅次于前列腺癌。膀胱癌常在患者出现以血尿等主要临床症状后被首次诊断出。75％-85％的新发现病例为非肌层浸润性，可以通过经尿道手术切除，然而它们却具有50％-80％的高复发率，并有10％-30％的几率发展为肌层浸润性肿瘤，预后较差，需要终身随访复查。目前膀胱癌可以通过膀胱镜检查、细胞学以及组织学检查予以诊断。其中，膀胱镜检查仍是诊断的“金标准”。但此方法容易漏诊微小或扁平的病灶，并且因有创而给患者带来痛苦。然而，目前临床上常规使用的无创检测手段只有尿液细胞学检查，尽管其对于高级别膀胱癌的敏感性为70％-80％，特异性为90％-95％，但对于低级别的膀胱癌敏感性仅为10％-40％，因此无法作为早期诊断的“金标准。膀胱癌早期多为低级别，因此低级别膀胱癌敏感度的提高对于膀胱癌的早期诊断具有十分重要的意义。

为了提高无创检测膀胱癌的水平，尿膀胱癌标志物的研究受到了很大的关注，美国FDA已经批准将BTAstat、BTAtrak、NMP22、FDP、ImmunoCyt和尿荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization,FISH)用于膀胱癌的检测。多项研究显示FISH技术具有较高的敏感性和特异性。目前已有多种商品化的FISH试剂盒用于临床。但对于有膀胱炎症、结石、放疗等病史者的尿液标本中，反应性脱落细胞可能造成FISH结果的特异性降低。其他还有许多的标志物，如:端粒酶、存活素(survivin)、微卫星分析、CYFRA21-1和LewisX等，在检测膀胱癌的临床研究中显示了较高的敏感性和特异性。虽然大部分尿液膀胱癌标记物显示出了较高的敏感性，但是其特异性却普遍低于尿细胞学检查。到目前为止，仍然没有一种理想的标志物能够取代膀胱镜和尿细胞学检查而对膀胱癌的诊断、治疗、术后随诊和预后等方面做出足够的判断，且免疫磁珠在膀胱癌的早期检测方面也无法满足当前的要求。

另一方面，许多研究发现相对于正常的组织细胞而言，肿瘤细胞其表面电荷有明显的异常，当细胞发生癌变时，其电导率往往也会发生改变，正常细胞表面电荷接近中性或带有少量负电荷，而许多研究则认为多数肿瘤细胞膜上携带有大量的负电荷，在论文Changes in Electric Properties of Human Breast Cancer Cells(Journal of Membrane Biology,2013,246(2):161-6)，论文Surface charge:a key determinant of protein localization and function(Cancer Research,2010,70(4):1277)，论文Changes in Surface Charge Density of Blood Cells in Fatal Accidental Hypothermia(Journal of Membrane Biology,2015,248(6):1175-1180)中有记载，同时也有研究认为负电荷的数量与肿瘤细胞的恶性程度和转移能力呈正相关，论文“细胞电荷:抗肿瘤研究潜在的重要靶标”(中国药理学通报,2010,26(12):1541-1544)有记载，因此肿瘤细胞表面异于正常细胞的负电荷具有作为肿瘤细胞表面特殊的标志物的潜力被应用于肿瘤的早期检测以及预后和治疗。

因此，基于以上研究，如何提高低级别肿瘤细胞诊断敏感度，对于癌症的早期诊断具有十分重要的意义，对于满足临床进行癌症的早期检测非常必要。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是提供一种快速检测体液中肿瘤细胞的试剂盒，其具有高灵敏度、操作简便、成本低、适用范围广的特点，能够满足临床进行癌症的早期检测，为达上述目的，本发明采用的技术方案如下：