[发明专利]CYB5R1作为儿童I型糖尿病的诊断标志物

说明书

技术领域

本发明属于诊断领域，涉及一种儿童I型糖尿病的诊断工具，还涉及血液中CYB5R1基因在制备儿童I型糖尿病诊断工具中的应用。

背景技术

I型糖尿病(T1DM)为在遗传基础上由环境因素激发的、自身免疫介导的以胰腺β细胞受损为特征的自身免疫性疾病，是一种由于胰岛素缺乏或作用不足引起的能量代谢疾病。通常在儿童、少年、青年时期被诊断，发病风险最高的年龄段是10-14岁，青少年以后，发病率下降。儿童I型糖尿病以往多指小于15岁发生的糖尿病，由于WHO(世界卫生组织)已经儿童定义为0-18岁，因此儿童糖尿病应指小于18岁发生的糖尿病。儿童1型糖尿病的临床表现为多尿、多饮、多食及消瘦。儿童1型糖尿病比成人糖尿病重，起病较急，不易早期发现，胰岛β细胞的功能可出现明显下降甚至发展为衰竭，早期并发症即可出现，如糖尿病酮症甚至酸中毒，如处理不及时或不当，可能危及生命。I型糖尿病确切发病机制尚未完全阐明，目前认为是遗传、免疫和环境因素共同作用所致。

高通量测序技术(High-throughput sequencing)是指能够一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，每一次序列测定的读长一般较短的测序技术。高通量测序技术是对传统测序一次革命性变革，随着2005年罗氏的454测序仪及2006年Solexa测序仪出现后飞速发展，2009年左右高通量测序技术在国内兴起。高通量测序类型分为多种，基因芯片、基因深度测序(genome re-sequencing)、转录组深度测序(transcriptome re-sequencing又称RNA-Seq)等。

细胞的功能是从基因的表达开始的，转录组是指某一时间细胞内所有基因转录而来的RNA总称。通过高通量测序技术可获得基因表达的RNA水平有关信息，可以揭示基因表达与一些生命现象之间的内在联系。

高通量测序技术的快速发展和应用，为儿童I型糖尿病发病机理的研究提供了更加全面和快速的分析手段，也为儿童I型糖尿病的进一步治疗方案提供崭新思路。深入研究儿童I型糖尿病相关基因的调控机制，有助于了解儿童I型糖尿病的遗传分子机制，为寻找新的药物提供理论依据。

发明内容

本发明利用芯片筛选并使用实时荧光定量PCR验证获知CYB5R1基因在儿童I型糖尿病血液中差异表达。本发明首次发现CYB5R1基因在儿童I型糖尿病中的作用，可用于开发通过检测CYB5R1基因来诊断儿童I型糖尿病的产品。

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种诊断儿童I型糖尿病的工具，所述产品包括芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台。

其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测CYB5R1基因转录水平的针对CYB5R1基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的CYB5R1蛋白的特异性抗体；所述基因芯片可用于检测包括CYB5R1基因在内的多个基因(例如，与儿童I型糖尿病相关的多个基因)的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括CYB5R1蛋白在内的多个蛋白质(例如与儿童I型糖尿病相关的多个蛋白质)的表达水平。通过将多个与儿童I型糖尿病的标志物同时检测，可大大提高儿童I型糖尿病诊断的准确率。

其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测CYB5R1基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括CYB5R1蛋白的特异性抗体。进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时荧光定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片方法检测CYB5R1基因表达水平过程中所需的试剂。优选的，所述试剂包括针对CYB5R1基因的引物和/或探针。根据CYB5R1基因的核苷酸序列信息容易设计出可以用于检测CYB5R1基因表达水平的引物和探针。

所述高通量测序平台包括检测CYB5R1基因表达水平的试剂。

所述试纸包括试纸载体和固定在试纸载体上的寡核苷酸，所述寡核苷酸能够检测CYB5R1基因的转录水平。