[发明专利]一种莲藕褐变相关基因的瞬时表达方法和应用

权利要求书

1.一种莲藕褐变相关基因的瞬时表达方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)将带有目的基因的表达载体质粒电导转化至农杆菌中，平板培养，并将培养物与注射液混合，得到目的基因的农杆菌培养液；

(2)选择无机械损伤的新鲜莲藕，莲藕去泥、洗净、去皮、切片，分别注射带有对照基因和目的基因的农杆菌培养液；然后，将注射后的莲藕切片样品进行褐变实验，定期液氮速冻取样，对样品进行褐变度测定，从而分析目的基因在莲藕切片中瞬时表达的效应。

2.根据权利要求1所述的莲藕褐变相关基因的瞬时表达方法，其中，步骤(1)包括：将带有目的基因的表达载体质粒电导转化至农杆菌中，制成甘油菌，零下80℃保存，将保存的甘油菌接种至LB平板，25-30℃培养2天，实验的前一天，再转移至新的LB平板培养，将LB平板上的农杆菌与注射液体均匀混合，得到目的基因的农杆菌培养液。

3.根据权利要求1或2所述的莲藕褐变相关基因的瞬时表达方法，其中，所述注射液为5-20mM MgCl₂和0.2-0.8mM乙酰丁香酮的二甲基亚砜溶液。

4.根据权利要求1所述的莲藕褐变相关基因的瞬时表达方法，其中，所述褐变实验在20-25℃下进行。

5.利用权利要求1所述的莲藕褐变相关基因的瞬时表达方法，其中，该方法还包括目的基因的克隆与表达载体的构建。

6.根据权利要求1所述的莲藕褐变相关基因的瞬时表达方法，其中，所述目的基因为NnPAL1基因、NnPPOA基因和NnPOD3基因中的至少一者。

7.根据权利要求6所述的莲藕褐变相关基因的瞬时表达方法，其中，NnPAL1基因的全长序列通过引物SEQ ID NO：1和引物SEQ ID NO：2获得；NnPPOA基因的全长序列通过引物SEQ ID NO：3和引物SEQ ID NO：4获得；NnPOD3基因的全长序列通过引物SEQ ID NO：5和引物SEQ ID NO：6获得。

8.根据权利要求1所述的莲藕褐变相关基因的瞬时表达方法，其中，所述对照基因为SK基因。

9.权利要求1-8中任意一项所述的莲藕褐变相关基因的瞬时表达方法用于莲藕褐变相关基因的确认和调控研究。