[发明专利]利用分子标记对3种草莓品种进行快速鉴别的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体提供一种利用分子标记对3种草莓品种进行快速鉴别的方法。由于草莓在植株与果实形态上直接鉴别的难度较大，即采用分子标记中的SSR标记法对已在本地区范围内推广种植的草莓品种进行指纹图谱的比较，快速鉴别出品种。本发明主要包括提取草莓的总DNA，筛选SSR引物，通过对不同草莓样品的PCR扩增，仅用3对SSR引物鉴别出与对照品种形成显著条带差异的品种，扩增结果可有效地用于筛选不同于在本地区长期种植的传统品种的引进品种，以达到保护品种知识产权的目的。

技术领域

本发明属于园艺育种领域与分子生物学领域，更具体涉及一种利用分子标记对3种草莓品种进行快速鉴别的方法。

技术背景

我国是世界草莓种植大国，产量和种植面积都位居世界第一，目前生产使用的品种多是欧美和日韩的品种，对产量高，抗性强，商品性好的品种需求旺盛。福建省的宁德地区是我国东南区域草莓的主产区，但当地的大规模主栽品种是早年从欧美引进的法兰地和甜查理，此外，也种植有从外省引进的如红颜、红宝等品种。本发明于2010年首次从美国和北京等地引进一系列品种，通过小区试验筛选出了3个中日性的草莓品种紫莓1号、紫莓3号和太空1号，适应在福建沿海半促成栽培和露地栽培，与我省主栽培品种法兰地比较，具有产量高，抗白粉病，黄萎病，红蜘蛛，硬度大，果型美观，货架期长等特点，值得进一步研究推广。本项目组自2012年起，3个品种陆续提供给宁德蕉城、霞浦、连江、闽侯、惠安、漳州、漳浦、连城等地种植示范推广。通过在宁德的蕉城虎贝乡、洋中镇际头村组建草莓苗育种及过渡驯化基地，使得新品种的繁育速度增加20倍以上，每年繁育300多万株一代种苗。2013年新品种推广种植面积达650亩以上。平均每亩产值在2万元左右，增加社会经济效益1000多万元。由于质量好深受种植户的喜爱，2年来专业合作社和农民育苗户直接收入达80万元以上。社会经济效益显著。

由于我们筛选出的三个品种具有果个大，产量高，抗性强，硬度大，架期长的特点。不仅适合在本省有推广应用前景，也可在全国进一步示范推广。而在推广的过程中，由于草莓品种的取材繁育简单易行，驯化成活率高，技术门槛和成本低，种植户易学快懂；有关品种知识产权的认定与归属的问题就逐渐地显现出来。而对品种进行快速有效的鉴定，是知识产权认定最基本的证据。因此，本项目组依据SSR分子标记技术检测重现性高，稳定性好的特点，在前人对草莓进行的SSR标记研究工作的基础上，从数十对SSR引物中筛查出3对本项目引进的3个草莓品种可以进行有效鉴别的引物，并建立快速的鉴定程序。为我们引进的三个草莓品种的鉴定和知识产权保护奠定了基础。同时，拟首先对引物序列及鉴定过程申请专利保护。

发明内容

本发明提供了一种利用分子标记对3种草莓品种进行快速鉴别的方法。通过大量SSR引物的扩增反应，筛选出3个SSR位点的引物对，能够在引进的新品种及若干个已在本区域推广种植的旧品种之间形成显著差异的电泳条带，扩增结果可有效地用于鉴别草莓品种。

所述SSR位点指3个微卫星序列位点两侧的3对引物序列，所述引物的序列如下：A，上游：ACGAGGCCTTGTCTTCTTTGTA，下游：GCTCCAGCTTTATTGTCTTGCT；

B，上游：GCCTTGATGTCTCGTTGAGTAG，下游：TACCTTCTGCATTCACCATGAC ；

C，上游：CTTCACCTAATCACTTGCCTGA，下游GGTCTGTTCCTTTCCTTGTTTG；

所述的草莓品种为紫莓1号、紫莓3号和太空1号。

SSR引物对草莓品种进行鉴别的方法，所述方法包括下列步骤：草莓样品中的总DNA的提取；PCR扩增；PCR产物电泳及染色，根据电泳结果判别草莓株系。