[发明专利]用于乳腺癌荧光原位杂交检测的分子探针和检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医学检测领域，具体涉及一种用于乳腺癌荧光原位杂交检测的分子探针和检测试剂盒。

技术背景

乳腺癌是当今社会的重大公共卫生问题。在全球范围内，乳腺癌的发病率自20世纪70年代末开始一直呈上升趋势。中国不是乳腺癌的高发国家，但是近年来，我国乳腺癌发病率的增长速度确高出高发国家1-2个百分点。据国家癌症中心和卫生部疾病预防控制局2012年公布的2009年乳腺癌发病数据显示：全国肿瘤登记地区乳腺癌发病率位居女性恶性肿瘤的第1位，女性乳腺癌发病率(粗率)全国合计为42.55/10万，城市为51.91/10万，农村为23.12/10万。

1894年Halsted首先提出乳腺癌根治术，经过100多年的技术发展，到今天的综合治疗，乳腺癌的诊断和治疗方法不断提高。但是其较高的发病率和致死率仍严重威胁着大部分女性的健康。随着治疗理念的转变和更新，乳腺癌的治疗进入了综合治疗阶段，并形成局部治疗和全身治疗并重的治疗模式。临床上，根据肿瘤的分期和患者的身体情况，综合考虑采用手术、放疗、化疗，内分泌治疗、生物靶向治疗等多种治疗手段。而在这些治疗方法中，对肿瘤标志物的检测和鉴别成为了乳腺癌诊断过程中重要的医学参考指标。有助于提早诊断发现乳腺癌的发病，更为有效准确的估计乳腺癌患者的预后，以及对不同患者进行个性化的治疗。

近年研究表明，雌激素分泌过多和长期作用是乳腺癌发病的一大因素，并证实了雌激素可以存在于乳腺癌细胞中。因此，在临床上，对雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的定性诊断，成为乳腺癌预后和内分泌治疗的重要指标。据相关研究表明，化疗可以更好的治疗雌激素受体阴性的乳腺癌患者。原癌基因HER-2位于染色体17q21上，其基因产物是一种跨膜酪氨酸激酶受体，该受体通过二聚体的方式偶联，激活信号转导通路，促进肿瘤的发生发展。因此选择HER-2为标记物并对患者HER-2状态进行准确的检测和判读是重要的一种诊疗手段。EPCR是一种肿瘤细胞内皮蛋白C受体，有研究表明，MK可通过EPCR/PAR1通路促进乳腺癌MDA-MB-231细胞体外血管生成，因此EPCR作为乳腺癌产生的重要信号通路，可以选择EPCR作为靶点，通过对EPCR的表达检测进行乳腺癌的诊断。Ki-67抗原是细胞核内分裂增殖相关蛋白，表达于细胞周期的G1期，S期和G2期，而在G0期和其它细胞周期则不表达，它的表达水平可以提示处于有丝分裂时期的细胞数量，是乳腺癌预后的一个独立的预测因子。有研究表明，Luminal B型乳腺癌具有HER-2阳性、Ki-67高表达等特点，使的其与Luminal A型乳腺癌相比具有对内分泌治疗相对耐药，临床预后差等特点。鉴于以上所述标记物在乳腺癌肿瘤发病机制的特点，结合荧光原位杂交技术，建立一种包括多种效应物的针对乳腺癌的诊疗检测方法，具有重要的研究与临床意义，可以辅助医生更准确快速的对相关病人个体的诊治。

发明内容

本发明的目的在于克服现有的针对乳腺癌的检测试剂盒的准确性不足和效应物靶点的选择不合理的缺陷，提供一种包括五种效应物靶点，在实际临床中检测方便，快速，结果可信的荧光原位杂交检测试剂盒，将该检测试剂盒用于乳腺癌检测，能够克服荧光原位杂交技术在乳腺癌诊断方面的困难。

本发明通过以下技术方案实现上述目的：

一种用于乳腺癌荧光原位杂交检测的分子探针，包括如下探针中的一种或多种：

ER探针，其序列如序列表中的Seq ID NO:1序列所示；

PR探针，其序列如序列表中的Seq ID NO:2序列所示；

HER-2探针，其序列如序列表中的Seq ID NO:3序列所示；

EPCR探针，其序列如序列表中的Seq ID NO:4序列所示；

Ki-67探针，其序列如序列表中的Seq ID NO:5序列所示。

一种包含权利要求1所述的分子探针的检测试剂盒，其具有杂交液(X2)、变性液和DAPI复染剂。

进一步地：

所述杂交液含有五种特异探针，分别为：ER探针，其序列如序列表中的Seq ID NO:1所示：PR探针，其序列如序列表中的Seq ID NO:2所示：HER-2探针，其序列如序列表中的Seq ID NO:3所示：EPCR探针，其序列如序列表中的Seq ID NO:4所示：Ki-67探针，其序列如序列表中的Seq ID NO:5所示。

所述杂交液分为两管，每管含有所述五种特异探针中的三种探针，其中EPCR在两管中都含有，其他探针只在一管中含有。