[发明专利]一种Cu-MOF标记的DNA适配体传感器用于检测啶虫脒的方法

权利要求书

1.一种基于Cu-MOF的电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于，信号DNA标记物Cu-MOF近电极端；具体制备步骤如下：

取5μL 1.0×10^-7M的cDNA溶液滴涂在Au-PEDOT-rGO/GCE表面并置于40℃下孵育3.5h，用pH 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗除去未结合的cDNA，并在常温下晾干得cDNA/Au-PEDOT-rGO/GCE；用移液枪移取5μL 10μM的MCH溶液滴涂在修饰电极表面，用来封闭修饰电极表面的非特异性结合位点，孵化1h后用pH8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗，并常温干燥得MCH/cDNA/Au-PEDOT-rGO/GCE；最后取5μL 1.0×10^-7M的啶虫脒适配体apt滴涂在该修饰电极表面，置于40℃下孵育2h后用pH 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗，得到apt/MCH/cDNA/Au-PEDOT-rGO/GCE；

在apt/MCH/cDNA/Au-PEDOT-rGO/GCE电极表面滴加不同浓度的啶虫脒，40℃下孵育2h并用pH 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗电极，最后滴加5μL 1.0×10^-7M的信号探针pDNA/Au/Cu-MOF溶液于电极表面，孵育40min后用pH 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗，得测试用的电极；

Au-PEDOT-rGO/GCE制备方法为：在5mL含22.5mM的3,4-乙烯二氧噻吩EDOT的乙醇溶液中加入70mL 0.65mM的HAuCl₄水溶液，在室温下快速搅拌，使EDOT聚合成聚3,4-乙烯二氧噻吩PEDOT，持续搅拌4h后，加入5mL 0.5mg/mL的GO溶液，形成金-聚3,4-乙烯二氧噻吩-氧化石墨烯Au-PEDOT-GO，获得的Au-PEDOT-GO超声2h使Au-PEDOT-GO和GO彻底的分散，缓慢加入5.5mL 0.16M的NaBH₄后，搅拌6h，分别用去离子水和乙醇清洗产物，将获得固体加入50mL的去离子水中使其分散均匀，用移液枪移取10μL的Au-PEDOT-rGO复合物滴涂于裸玻碳电极GCE表面，常温晾干得Au-PEDOT-rGO/GCE；

信号探针pDNA/Au/Cu-MOF制备方法为：用分析天平称取0.9981g的均苯三酸溶于50mL去离子水中，逐滴滴加1M的NaOH将溶液pH调至7；在另一个烧杯中，用分析天平称取0.6342g的Cu(NO₃)₂溶于50mL的去离子水中；将制备的金属溶液置于分液漏斗中，在1000rpm搅拌下逐滴将金属溶液滴加至含均苯三酸的溶液中，缓慢出现蓝色沉淀Cu-MOF，放置12h后，6000rpm离心，并用乙醇清洗数次，70℃下干燥5h，再100℃干燥48h，得Cu-MOF；滴加20μL1％的HAuCl₄和2mL 2mM的NaBH₄到Cu-MOF溶液中，持续搅拌1h后，6000rpm离心15min，去离子水洗涤2-3次得到Au/Cu-MOF，将其分散到2mL去离子水中；500μL 10^-7M的信号探针pDNA溶液添加到所制备的500μL的Au/Cu-MOF液中培养过夜，然后用100μL 2M的NaCl培养24h，在13000rpm下离心10min，用移液管吸取上清液中游离的信号探针pDNA；将沉淀物冲洗和离心两次，再分散在10mL 50mM的Tris-HCl缓冲液中，信号探针pDNA标记成功，记为pDNA/Au/Cu-MOF。

2.权利要求1所述方法制备的电化学适配体传感器在检测啶虫脒中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，用于啶虫脒检测的检测步骤如下：

(1)以权利要求1中所述测试用的电极为工作电极，铂电极为对电极，Ag/AgCl电极为参比电极，在含10mL pH7.0 PBS缓冲液中进行差分脉冲伏安扫描，扫描的电位区间是-0.8～0.8V，记录扫描曲线；差分脉冲伏安扫描的峰电流Ip与啶虫脒浓度的对数logc呈现良好的线性关系，线性方程为Ip(μA)＝-51.406logc-762.096，c是浓度，单位是mol/L，线性相关系数r＝0.9909，检出限为3.0×10^-16mol/L；

(2)利用上述线性方程检测未知液中啶虫脒样品的浓度：在apt/MCH/cDNA/Au-PEDOT-rGO/GCE电极表面滴加未知浓度的啶虫脒，40℃下孵育2h并用pH 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗电极，最后滴加5μL 1.0×10^-7M的信号探针pDNA/Au/Cu-MOF溶液于电极表面，孵育40min后用pH 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗；按照步骤(1)记录示差脉冲伏安图，得峰电流值Ip，将Ip带入上述线性方程，计算出待测液中啶虫脒的浓度。