[发明专利]一种提高莫能菌素产量的重组工程菌的构建方法及应用

权利要求书

1.一种提高莫能菌素产量的重组工程菌的构建方法，其特征在于用下述方法构建：

(1)以合成的synmonH基因片段为模板，以SEQ ID No.1所示序列为上游引物，以SEQ IDNo.2所示序列为下游引物，扩增synmonH基因；

(2)将synmonH基因以酶切连接的方式，连接到pLCY009载体上，构建pZY1371载体；

(3)将pZY1371载体转化到肉桂地链霉菌，筛选，获得提高莫能菌素产量的重组工程菌ST02101；

其中

SEQ ID No.1：5’-GGAATTCCATATGTCCGGCGTCGAGCGCGG-3’，下划线处为Nde I酶切位点；

SEQ ID No.2：5’-GCTCTAGAGACTAGTTCATCAGCCCAGGGCGGCCT-3’，下划线处分别为Xba I酶切位点。

2.一种提高莫能菌素产量的重组工程菌的构建方法，其特征在于用下述方法构建：

(1)以合成的synmonRI基因片段为模板，以SEQ ID No.3所示序列为上游引物，以SEQID No.4所示序列为下游引物，扩增synmonRI基因；

(2)将synmonRI基因以酶切连接的方式，连接到pLCY009载体上，构建pZY1372载体；

(3)将pZY1372载体转化到肉桂地链霉菌，筛选，获得提高莫能菌素产量的重组工程菌ST02102；

其中

SEQ ID No.3：5’-GGGAATTCCATATGCGCTACGAGATGCTGGG-3’，下划线处为Nde I酶切位点；

SEQ ID No.4：5’-CTAGTCTAGATCATCAGCGGCCGGACAGG-3’，下划线处为Xba I酶切位点。

3.一种提高莫能菌素产量的重组工程菌的构建方法，其特征在于用下述方法构建：

(1)以合成的synmonRII基因片段为模板，以SEQ ID No.5所示序列为上游引物，以SEQID No.6所示序列为下游引物，扩增synmonRII基因；

(2)将synmonRII基因以酶切连接的方式，连接到pLCY009载体上，构建pZY1373载体；

(3)将pZY1373载体转化到肉桂地链霉菌，筛选，获得提高莫能菌素产量的重组工程菌ST02103；

其中

SEQ ID No.5：5’-GGGAATTCCATATGCCGGGCCTGCGCGAGCGCAA-3’，下划线处为Nde I酶切位点；

SEQ ID No.6：5’-CTAGTCTAGATCATCACGGGCGCAGGTCCTCCAGG-3’，下划线处为Xba I酶切位点。

4.一种提高莫能菌素产量的重组工程菌的构建方法，其特征在于用下述方法构建：

(1)以pZY1372载体为模板，以SEQ ID No.7所示序列为上游引物，以SEQ ID No.8所示序列为下游引物，扩增ermE*和synmonRI基因；

(2)将ermE*-synmonRI基因以酶切连接的方式，连接到pZY1371载体上，构建pZY1374载体；

(3)将pZY1374载体转化到肉桂地链霉菌，筛选，获得提高莫能菌素产量的重组工程菌ST02104；

其中

SEQ ID No.7：5’-GACTAGTGGTCGATCTTGACGGCTG-3’，下划线处为Spe I酶切位点；

SEQ ID No.8：5’-GACTAGTCCGGCTCGTATGTTGTGT-3’，下划线处为Spe I酶切位点。