[发明专利]一种用于检测猪源性成分的试剂盒和方法

说明书

本发明涉及包含SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2所示引物对和SEQ ID NO.3所示探针的用于猪源性成分检测的试剂盒，还涉及用于检测猪源性成分的方法。本发明试剂盒及方法可以准确检测肉及肉制品中的猪源性成分，检测快速、准确，成本低，特异性好，灵敏度高，有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种用于检测猪源性成分的试剂盒和方法。

背景技术

近年来，伴随着肉类市场的急剧扩大，肉类掺假的事件频频发生，掺假的方式越来越多，形式越来越复杂，已成为全球食品行业的一个突出问题。肉制品掺假不仅会引起个体的健康风险，包括疾病感染、代谢紊乱、过敏反应等，而且肉制品的掺假更易引起经济、宗教、道德的问题。例如清真食品中混有配料表中未标明的猪源性成分，会严重侵犯我国少数民族和阿拉伯等伊斯兰教国家的宗教信仰和民族习惯，并且侵犯了消费者的知情权。

目前，肉类掺假常见的检测技术有ELISA法、显微判定法、电子鼻法、质谱法等，但都存在灵敏度低、周期长、不能检测熟肉等缺点而未被广泛使用。PCR技术具有灵敏度高、操作简便、抗干扰能力强等优势，越来越多被用于动物源性成分检测。

现有标准《SN/T 3730-2013食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法》的第8部分为利用实时荧光PCR法检测食品及饲料中的猪源性成分，但我们在检测过程中发现，该方法在检测时会出现假阳性，例如根据鹅类成分的Ct 值可能会被判定为猪源性成分，无法保证判定结果的准确性。

王颖(王颖等，荧光定量PCR方法检测畜肉食品中猪源性成分[J]，食品安全质量检测学报，2013，5:100-104)报道的检测猪源性成分的PCR方法，其结果中扩增曲线不佳，大多无典型S型曲线，引物结合效率差，同样无法保证结果的准确性。姜洁(姜洁等，应用实时荧光PCR技术量化检测羊肉中猪源性和鸡源性成份[J]，食品安全质量检测学报，2015，9:3701-3707)、李楠(李楠等，北京地区牛_羊肉片中鸭_鸡_猪源性成分调查[J]，中国中国食品卫生杂志，2014，3:227-232)报道的定量PCR引物及方法也存在PCR扩增曲线不理想、扩增效率不稳定等缺点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测猪源性成分的试剂盒和方法。

本发明提供了SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的引物对、SEQ ID NO.3 所示的探针。

本发明还提供了SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的引物对和SEQ ID NO.3所示的探针在制备检测猪源性成分的试剂中的用途。

其中，所述试剂是检测肉及肉制品中猪源性成分的试剂。

本发明还提供了一种用于检测猪源性成分的试剂盒，它包括SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.2所示的引物对和SEQ ID NO.3所示的探针。

其中，它还包括实时荧光PCR预混液。

其中，它还包括Taq DNA聚合酶、MgCl₂、dNTP和反应缓冲液。

其中，所述试剂盒的组成为：

PCR反应总体积为20μL时，

其中，模板DNA的浓度为1ng/μL～100ng/μL；引物的浓度为10μmol/L；探针的浓度为10μmol/L。

本发明还提供了上述试剂盒在用于检测肉及肉制品中猪源性成分中的用途。

本发明还提供了一种检测猪源性成分的方法，它包括如下步骤：

(1)提取样本DNA：取待检样品，提取其中的DNA；