[发明专利]一种作为分子标记的与猪胴体性状相关的14-3-3ζ基因片段的克隆与应用

权利要求书

1.14-3-3ζ基因片段在猪胴体性状分子标记辅助选择中的应用，其特征在于，所述14-3-3ζ基因片段的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:3所示，所述猪胴体性状为皮率、瘦肉率、肥瘦肉比例和眼肌面积。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述序列表SEQ ID NO:3的长度为2050bp，在序列表SEQ ID NO:3第938bp处为T938C的碱基突变，导致BstxIPCR-RFLP多态性。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，检测所述碱基突变的引物对的DNA序列如下所示：

正向引物：5' TGCCTGATAATTGGTAT 3'；

反向引物：5' TTAGCGTGCTGTCTTTGT 3'。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述14-3-3ζ基因片段的克隆方法包括以下步骤：

步骤1：用人14-3-3ζ基因cDNA为探针，作同源序列筛选，获得同源性90%以上的表达序列标签；然后拼接猪EST-重叠群，根据EST-重叠群序列设计基因特异性外侧引物GSP-5、GSP-3和CDS区引物CDS-F、CDS-R，其DNA序列如下所示：

GSP-5：5’ AGACGACCCTCCAAGATGACCTACGG 3’，

GSP-3：5’ TGTCTGATGATGCCCTGCTTCCTTTGC 3’，

CDS-F：5’ CCCAGAGACTGCTGAACCC 3’，

CDS-R：5’ GTGGGACAGCATGGATGACA 3’；

以成年梅山猪肌肉组织中提取总RNA为模板，进行扩增、产物纯化和克隆测序，通过序列拼接获得如序列表SEQ ID NO:1所述的猪14-3-3ζ基因片段的cDNA序列；

步骤2：利用步骤1获得的猪14-3-3ζ基因片段cDNA序列比对人14-3-3ζ基因的基因组DNA，初步推测猪14-3-3ζ基因片段的结构，在第5至第7个内含子上设计引物，其DNA序列如下所示：

I5F：5’ TGCCTGATAATTGGTAT 3’，

I7R：5’ TTAGCGTGCTGTCTTTGT 3’；

以大白猪和梅山猪基因组DNA作为模版，进行扩增和克隆测序，获得如序列表SEQ IDNO:3所示的猪14-3-3ζ基因片段的核苷酸序列，其中第938bp处为T938C的碱基突变。