[发明专利]内嵌内标分子的纳米粒子表面增强拉曼光谱定量分析方法

权利要求书

1.一种内嵌内标分子的纳米粒子表面增强拉曼光谱定量分析的方法，所述方法包括：

(1)以金纳米粒子为内核，在内核表面修饰上内标分子，所述内标分子为对巯基苯甲酸；

(2)在内标分子外围包覆银外壳，得到Au-pMBA@Ag纳米粒子溶胶；

(3)将Au-pMBA@Ag纳米粒子溶胶与待测分子混合均匀，或者将Au-pMBA@Ag纳米粒子溶胶先制备成基底、再滴加待测分子；

(4)进行表面增强拉曼检测，及mapping。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述金纳米粒子为长方体或棒状金纳米粒子。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述Au-pMBA@Ag纳米粒子溶胶制备成单层基底。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述Au-pMBA@Ag纳米粒子中，pMBA分子所占金纳米棒表面积的比值为100％。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所待测分子为下列之一：R6G分子、结晶紫、氨基酸。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于所待测分子为R6G分子，所述方法如下：

(1)取金纳米棒，加入pMBA和十六烷基三甲基氯化铵，超声振荡0.5～2小时，然后离心，去上清，再加超纯水离心洗涤，得到修饰内标分子的金纳米棒；

(2)步骤(1)修饰内标分子的金纳米棒加到CTAC溶液中，50～60℃加热，磁力搅拌10～20min，然后加入硝酸银溶液，继续搅拌5～10min，再加入抗坏血酸，继续加热搅拌3～4小时，最终溶液颜色为绿色；离心、超纯水洗涤，再离心，沉淀转移到PVP乙醇溶液，超声2～h，离心、无水乙醇洗涤，离心、沉淀用无水乙醇重悬，得到Au-pMBA@Ag纳米粒子溶胶；

(3)Au-pMBA@Ag纳米粒子加入环己烷和二氯甲烷均匀混合，然后取混合溶液于离心管，并加入辛烷混合，滴加于直径2cm的水面上，待有机相完全挥发后，干净的硅片沉于液面下之后，通过提拉硅片将液面上的银纳米棒的膜转移到硅片表面，得到Au-pMBA@Ag纳米粒子单层基底；

(4)将步骤(3)制备好的基底泡于浓度分别为10nM、30nM、50nM、70nM、90nM和100nM的R6G乙醇溶液中过夜，取出自然晾干，置于共焦拉曼光谱显微镜上进行SERS成像；计算R6G 610cm^-1SERS强度与内标分子pMBA 1080cm^-1SERS强度的比值并做出与R6G浓度的关系图；

(5)将上述制备好的基底泡于待测样品溶液中过夜，取出自然晾干，置于共焦拉曼光谱显微镜上进行SERS成像，计算R6G 610cm^-1SERS强度与内标分子pMBA 1080cm^-1SERS强度的比值，对照步骤(4)关系图，即可获得待测样品溶液中的R6G浓度值。