[发明专利]一种污泥处理复合微生物菌剂的制备方法

权利要求书

1.一种污泥处理复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：将大肠杆菌、芽孢杆菌、硫氧化菌、放线菌、硝化细菌及乳酸菌混合制成复合微生物菌剂；具体包括以下制备步骤：

第一步：大肠杆菌与放线菌的培养：

称取15g营养肉汤培养基于500ml蒸馏水中，添加0.1-1g三环癸胺固体，经振荡搅拌后放入立式压力蒸汽灭菌器内杀菌消毒，开启超净工作台后打开紫外线进行杀菌10-20min，待高压杀菌后，取出培养基放置到超净工作台中，等培养基的温度降到60-70℃左右，在无菌的条件下，将大肠杆菌接种到培养基中，接种好大肠杆菌继续接种放线菌，然后放入生化培养箱中并将培养箱温度调至37-38℃，培养8-10h；

第二步：芽孢杆菌及乳酸菌的培养：

称取15g营养肉汤培养基于500ml蒸馏水中，经振荡搅拌后放入立式压力蒸汽灭菌器内杀菌消毒，开启超净工作台后打开紫外线进行杀菌20-30min，待高压杀菌后，取出培养基放置到超净工作台中，等培养基的温度降到50-60℃左右，在无菌的条件下，将芽孢杆菌接种到培养基中，接种好芽孢杆菌后添加0.1-1g二乙基丙二酰脲溶液混匀，继续接种乳酸菌后放入生化培养箱中并将培养箱温度调至35-37℃，培养8-10h；

第三步：硫氧化菌及硝化细菌的培养：

将培养工作中需要用到的接种环和酒精灯以及其它器具放置到超净工作台中，开启超净工作台，打开紫外灯，照射20-30min左右关闭紫外灯，将硫氧化菌制成的悬浮液在30-40℃，140-150r/min环境下于摇床中培养7d后添加硝化细菌继续培养，培养结束后的悬浮液放置于0-4℃冰箱中保存备用；

第四步：混合培养：

待混合培养液中活菌数大于等于1×10⁸个/ml后，分别用移液器取出，然后按照大肠杆菌与放线菌：芽孢杆菌及乳酸菌：硫氧化菌及硝化细菌的重量比为3-5：1-2：1的比例接种到固体培养基中，混合均匀，共同置于37℃的培养箱中培养10-14h。

2.根据权利要求1所述的一种污泥处理复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述制备方法中的第一步中称取15g营养肉汤培养基于500ml蒸馏水中，添加0.1-0.5g三环癸胺固体，经振荡搅拌后放入立式压力蒸汽灭菌器内杀菌消毒，开启超净工作台后打开紫外线进行杀菌20min，待高压杀菌后，取出培养基放置到超净工作台中，等培养基的温度降到60℃左右，在无菌的条件下，将大肠杆菌接种到培养基中，接种好大肠杆菌继续接种放线菌，然后放入生化培养箱中并将培养箱温度调至37℃，培养10h。

3.根据权利要求1所述的一种污泥处理复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述制备方法第二步中称取15g营养肉汤培养基于500ml蒸馏水中，经振荡搅拌后放入立式压力蒸汽灭菌器内杀菌消毒，开启超净工作台后打开紫外线进行杀菌25min，待高压杀菌后，取出培养基放置到超净工作台中，等培养基的温度降到60℃左右，在无菌的条件下，将芽孢杆菌接种到培养基中，接种好芽孢杆菌后添加0.5-1g二乙基丙二酰脲溶液混匀，继续接种乳酸菌后放入生化培养箱中并将培养箱温度调至36℃，培养10h。

4.根据权利要求1所述的一种污泥处理复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述制备方法第三步中将培养工作中需要用到的接种环和酒精灯以及其它器具放置到超净工作台中，开启超净工作台，打开紫外灯，照射25min左右关闭紫外灯，将硫氧化菌制成的悬浮液在40℃，140r/min环境下于摇床中培养7d后添加硝化细菌继续培养，培养结束后的悬浮液放置于2℃冰箱中保存备用。

5.权利要求1所述的一种污泥处理复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述制备方法第四步中待混合培养液中活菌数大于等于1×10⁸个/ml后，分别用移液器取出，然后按照大肠杆菌与放线菌：芽孢杆菌及乳酸菌：硫氧化菌及硝化细菌的重量比为3-4：1.2-1.5：1的比例接种到固体培养基中，混合均匀，共同置于37℃的培养箱中培养12h。

6.权利要求1或2所述的一种污泥处理复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述三环癸胺固体的添加量以其有效成分计。

7.权利要求1或3所述的一种污泥处理复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述二乙基丙二酰脲溶液为二乙基丙二酰脲的水溶液，质量浓度为1％，其添加量以二乙基丙二酰脲有效成分计。