[发明专利]采用分光光度法测定动物肝脏中维生素A含量的方法

权利要求书

1.采用分光光度法测定动物肝脏中维生素A含量的方法，其特征在于：包括步骤：

(1)配置维生素A标准溶液：准确称取维生素A乙酸酯100.0mg于500mL皂化瓶中，加60mL无水乙醇、40mL30％KOH甲醇溶液，于100℃回流皂化30min，冷却后用乙醚反复提取3次，并用甲醇定容至100mL容量瓶中，得维生素A的标准溶液；

(2)分别量取0.05-1.0mL的维生素A标准液于比色管中，分别用三氯甲烷定容至5mL，各管加入乙酸酐1滴；将比色管移至分光光度计前，在650nm波长处，用空白溶液调节吸光度至零点，加入5mL三氯化锑-三氯甲烷溶液，立刻测定其吸光度；以吸光度为纵坐标，维生素A含量为横坐标绘制标准曲线图；

(3)对动物肝脏样品经过研磨、提取及浓缩的前处理，得到动物肝脏提取液；测定所得到的动物肝脏提取液的吸光度，根据下列公式计算样品中维生素A的含量；

X=cm×V×1001000]]>

其中，X-试样中维生素A的含量，单位为mg/100g；c-根据测得的动物肝脏提取液的吸光度由标准曲线图上查得试样中维生素A的含量，单位为μg/mL；m-试样质量，单位为g；V-提取后加三氯甲烷定量之体积，单位为mL；100-以每百克试样计。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述样品的前处理包括：

研磨：精确称量5g试样，放入盛有15g无水硫酸钠的研钵中，研磨至试样中水分完全被吸收，并均质化；

提取：小心地将全部均质化试样移入带盖的三角瓶中，准确加入50mL乙醚，压紧盖子，用力震荡5min，使试样中维生素A溶于乙醚中，使其自行澄清；

浓缩：取澄清的乙醚提取液5mL，放入比色管中，在80℃水浴上抽气蒸干，立刻加入1mL三氯甲烷溶解残渣。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述标准曲线的绘制如下：分别准确量取0mL、0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL和1.0mL的维生素A标准液于7个比色管中，分别用三氯甲烷定容至5mL，各管加入乙酸酐1滴；将7个比色管移至分光光度计前，在650nm波长处，用空白溶液调节吸光度至零点，迅速加入5mL三氯化锑-三氯甲烷溶液，立刻测定其吸光度；以吸光度为纵坐标，维生素A含量为横坐标绘制标准曲线图。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在经过前处理后的样品试样中加入一定量的维生素A，然后按照标准曲线步骤测定样品中维生素A的浓度，从而得到样品的加标回收率。