[发明专利]一种抑制素B测定试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种抑制素B测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

抑制素B(inhibin B,INH-B)是睾丸来源的糖蛋白激素，成年男性体内血清抑制素B水平与FSH呈显著负相关，对FSH起负反馈作用。男性出生后不久，血清抑制素B水平逐渐上升，抑制素B与FSH之间一直维持负相关关系，20~30岁时，抑制素B水平到达高峰，此后抑制素B水平随年龄增加逐渐降低。生精功能低下与生精阻滞男性血清抑制素B水平显著低于正常生精功能男性，唯支持细胞综合征（SCO）男性血清抑制素B水平极低，SCO的发生与血清抑制素B的水平显著相关，血清抑制素B的水平还与睾丸体积、精子总数显著相关。抑制素B水平反映了整个睾丸组织的功能，是输精管道的直接产物，成年男性血清中维持可检测的抑制素B水平需要生精细胞的存在，因此抑制素B被认为是男性精子发生的血清标志物。

血清抑制素B测定可用于评价男性不育病人的生精功能，儿童隐睾、性早熟的诊断，对非阻塞性无精子症病人睾丸精子抽吸的预测，监测放、化疗对男性生精功能的损伤等。

目前，国内外用于INHB检测采用的方法原理主要有免酶联免疫法、化学发光法和胶体金法：化学发光需要专用分析仪，且价格昂贵，酶联免疫法大多采用96微孔板检测，步骤繁琐耗时，胶体金法操作简单、使用方便、检测速度快。

发明内容

本试剂盒采用的基本原理为免疫胶体金层析法。试纸条上的检测带（T）包被有与待检物相对应的抗INHB抗体，在对照带（C）包被抗亲和素抗体，在偶合物垫上包被有胶体金标记的抗INHB抗体和胶体金标记的亲和素。检测时，当样本中含有待检物时，样本中的待检物与胶体金抗体偶合物形成免疫复合物，随后免疫复合物上的待检物被捕获并固定在硝基纤维素膜上形成一条红色的检测带（T），同时，偶合物垫上的亲和素标记物流经对照区（C）并被已固定的抗亲和素抗体所捕获形成一条红色对照带，反应完成后，分析仪对对照带和检测带进行分析，计算出样本中的抗缪勒氏管激素浓度。

一种抑制素B测定试剂盒的制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：

一、包被硝酸纤维素膜

1）配制包被液：将抗INHB抗体以及亲合素抗体配制成0.5-2mg/mL的包被浓度；

2）包被：将硝酸纤维膜裁成膜片，将上一步骤中配置好的包被液包被在硝酸纤维膜片上；

3）干燥：将包被好的膜片置于37℃恒温干燥18-20个小时；

二、包被金标垫

1）标记抗体：制备胶体金标记鼠单抗INHB抗体和亲合素偶合物，并配制成0.5-2mg/mL的包被浓度；

2）包被：将玻璃纤维素膜切割为膜片，用封闭液封闭后干燥，将上一步骤中配制好的溶液包被在玻璃纤维素膜片上；

3）干燥：将包被好的玻璃纤维素膜片置于37℃恒温干燥18-22个小时，得到包被好的金标垫；

三、贴膜

1、将包被的硝酸纤维素膜、包被金标垫、样品垫和液体吸水垫按次序依次组合后黏贴在PVC板上，制成检测条；

四、切割

将（三）中检测条切成一定宽度的条带；

五、组装

1）将切割成单人份的小条按照次序装于金标外壳，压紧金标上盖，得到试剂盒。

进一步的，所述的试剂盒用于检测检测人血清、血浆、全血中的INHB浓度。

本发明的有益效果在于，本发明检测卡能够快速定量检测人血清、血浆、全血中的INHB浓度，首先操作简单，使用方便，单人份独立包被，克服了小样本量不能即时检测的弊端，20分钟即可报告浓度结果，大大缩短了检测时间。

具体实施例

一种抑制素B测定试剂盒的制备方法:

一、包被硝酸纤维素膜

1）配制包被液：将抗INHB抗体以及亲合素抗体配制成相应的包被浓度；

2）包被：将硝酸纤维膜栽成300mmX25mm的膜片，通过包被机，将1）中配置好的包被液包被在膜片上；

3）干燥：将包被好的膜片条置于37℃恒温干燥18-20个小时。

二、包被金标垫

1）标记抗体：制备胶体金标记鼠单抗INHB抗体和亲合素偶合物，并配制成相应的包被浓度；

2）包被：将玻璃纤维素膜切割为300X13mm的膜片，用封闭液封闭后干燥，将1）中配制好的溶液包被在垫上；

3）干燥：将包被好的金标垫条置于37℃恒温干燥18-22个小时。

三、贴膜